🗊Презентация Ферменты строение и свойства. Регуляция активности ферментов. (Лекция 1.3)

Тема №2: Ферменты. Регуляция активности ферментов. Цель: Дать представление о строении и функции ферментов. Основные вопросы лекции: 1.Строение и свойства ферментов. Различия ферментного состава органов и тканей. Изоферменты. Органоспецифические ферменты. Мультиферментные комплексы 2.Кофакторы ферментов: ионы металлов и коферменты. Коферментные функции витаминов. 3.Классификация ферментов и их номенклатура. 4.Механизм действия и особенности ферментативного катализа. Лекарственные препараты - ингибиторы и активаторы ферментов. 5.Единицы измерения активности и количества ферментов. Регуляция активности ферментов. 6.Изменения активности ферментов в онтогенезе и при патологии. Наследственные энзимопатии. Ферменты в медицине.

Строение и свойства ферментов. По своей химической природе ферменты (энзимы) являются простыми или сложными белками. В 1897 году Бертран обнаружил в составе ферментов различные кофакторы - органические вещества не белковой природы, необходимые ферментам для проявления их каталитических свойств и которые в последствии были названы коферментами (коэнзимами). Как впоследствии выяснилось, в роли кофакторов ферментов могут выступать ионы металлов и особой структуры органические вещества, называемые коферменты (коэнзимы). В зависимости от наличия в структуре фермента какого-либо кофактора, ферменты бывают одно и двухкомпонентные. Двухкомпонентные ферменты (холоферменты), как разновидность сложных белков, состоят из белковой части (апофермента) и простетической группы (кофермента).

Особенности структурной организации ферментов. Ферментам присущи все особенности структурной организации белков. Они имеют четыре уровня организации молекулы: первичный, вторичный, третичный и четвертичный На уровне третичной структуры, т.е. субъединицы, у фермента формируется каталитически активный центр, способный узнавать, связывать и обеспечивать катализ какого-либо конкретного субстрата. Активный центр фермента формируется 12-16 и более остатками аминокислот, находящимися в разных местах полипептидной цепи, но пространственно уложенных так, что обеспечивают функциональное единство домена (активного центра). У двухкомпонентных ферментов в формировании активного центра принимают участие кофакторы - коферменты.

Кроме активного центра у ферментов (Е) имеется регуляторный центр, через который обеспечивается регуляция активного центра посредством активаторов и ингибиторов. Кроме активного центра у ферментов (Е) имеется регуляторный центр, через который обеспечивается регуляция активного центра посредством активаторов и ингибиторов. Разновидностью регуляторного центра является имеющийся у ряда ферментов аллостерический центр. Аллостерическим (от греч. allos - иной, чужой) он потому, что молекулы, связывающиеся с этим центром по строению (стерически) не похожи на субстрат (S), но оказывают влияние на связывание и катализ субстрата, изменяя конфигурацию активного центра. Вещества, оказывающие влияние на аллостерический центр называются аллостерическими эффекторами. Соответственно эти эффекторы могут проявлять себя как активаторы или ингибиторы. Число активных, регуляторных и аллостерических центров у олигомерных ферментов (у ферментов имеющих четыре уровня структурной организации молекулы) может быть равно сумме субъединиц.

Четвертичная структура фермента Большинство ферментов, имея четыре уровня структурной организации, состоят из нескольких субъединиц (протомеров). Вследствие этого ферментам присуща множественность форм субъединичной их молекулярной организации. Один и тот же фермент может быть построен из разного набора субъединиц, формирующих изоэнзимный (изоферментный) ряд. Изоферменты - это генетически детерминированая физико-химическая разновидность молекулярных форм фермента, катализирующих одну и ту же реакцию. Например, лактатдегидрогеназа имеет пять изоформ (ЛДГ1-5) Наиболее изучены изоферменты лактатдегидрогеназы (ЛДГ). К ним относятся ЛДГ1, ЛДГ2, ЛДГ3, ЛДГ4, ЛДГ5 имеющих разную локализацию по тканям и органам, т.е. изоферменты органоспецифичны.

Каждый орган имеет характерный для него набор ферментов, которые при развитии в этом органе патологического процесса выходят в кровь. Каждый орган имеет характерный для него набор ферментов, которые при развитии в этом органе патологического процесса выходят в кровь. Например в сердце наибольшей активностью обладают изоферменты ЛДГ1 и ЛДГ2. В печени, скелетной мускулатуре преобладают ЛДГ5 и ЛДГ4. С целью диагностики в сыворотке крови определяют активность нескольких органоспецифических ферментов (так называемый ферментный спектр), характерных для данного органа, ткани. Так, при инфаркте миокарда определяют активность ЛДГ1, аспартатаминотрансферазы, креатинфосфокиназы, бэта-гидрокси-бутиратдегидрогеназы. При поражении печени (болезни Боткина) определяют активность ЛДГ4, ЛДГ5, аланинаминотрансферазы (АЛТ), сорбитдегидрогеназы. По увеличению активности в сыворотке крови клеточных, органоспецифических ферментов можно судить о локализации патологического процесса.

Кофакторы ферментов Кофакторы у ферментов бывают двух типов: - ионы металлов - коферменты Металлы, как кофакторы ферментов необходимы для проявления каталитических функций следующих ферментов: Fe++ и Fe+++ - Цитохромоксидаза Каталаза Пероксидаза Cu++ - Цитохромоксидаза Тирозиназа Zn++ - Карбангидраза ДНК-полимераза, алкоголь- дегидрогеназа, Альдолаза Mg++ - Гексокиназа АТФ-аза Пируваткиназа Фосфатаза Mn++ - Аргиназа К+ - Пируваткиназа АТФ-аза Ni++ - Уреаза Мо - Нитратредуктаза Se - Глутатионпероксидаза

Типы коферментов В отличие от ионов металлов, коферменты являются сложными органическими соединениями и по своей химической природе могут быть следующих типов: - коферметны алифатического ряда - коферменты ароматического ряда - коферменты гетероциклического ряда - коферменты нуклеотиды - металлокоферменты

Коферменты алифатического ряда К этой группе коферментов относятся глютатион и липоевая кислота. Глутатион - это кофермент таких ферментов как глиоксилаза, дегидрогеназа фосфоглицериновой кислоты и др. оксидаз. По химической природе глутатион трипептид: гамма-глютаминил-цистеинил- глицин. Липоевая кислота - это кофермент полиферментного комплекса окислительных декарбоксилаз альфа-кетокислот (пирувата и альфа-кетоглутарата). Липоевую кислоту иногда обозначают как витамин N: CН2--СН2--CН--(--СН2)4--СООН | | S ------------ S

Коэнзим Q (убихинон)

КОЭНЗИМ Q10 (УБИХИНОН) от лат. ubiquitous - повсеместный). Коэнзим Q10 (убихинон) по строению и окислительно-восстановительным свойствам близок к нафтохинонам (витамин К) и к токоферолам (витамин Е). это жирорастворимое соединение класса бензохинонов участвует энергетическом метаболизме клеток. Коэнзим Q10 – витаминоподобное соединение, которое вырабатывается в печени любого организма, включая человека (в молодости до 300 мг/сут.). Он также поступает в организм человека с продуктами животного происхождения. С возрастом - обычно где-то с 30 лет - содержание коэнзим Q10 в организме Он может стать настоящим «эликсиром молодости». Снижение процесса синтеза коэнзима Q10 усугубляется нервными и экологическими перегрузками, что заметно сказывается на работе сердца, почек, нервной, эндокринной и иммунной систем, зрения и пр.

Биологические эффекты убихинона ( коэнзима Q10) Коэнзим Q10 участвует в трансмембранном переносе электронов от водорода окисляемого субстрата к кислороду и тем самым стимулирует синтез АТФ в митохондриях. Сердце, печень, почки, селезенка, поджелудочная железа потребляют большое количество энергии АТФ, поэтому в них должен поддерживаться высокий уровень кофермента Q10. Неслучайно содержание коэнзим Q10 в миокарде значительно выше, чем во всех других органах Коэнзим Q10 является естественным защитником митохондрии от окислительного стресса и выполняет роль антиоксиданта не только в митохондриях разных тканей, но и в биологических мембранах всех клеток организма. В механизме повреждений, возникающих при ишемической болезни сердца, ведущую роль играют все те же свободные радикалы. При этом выживание клеток и восстановление их функции решающим образом зависит от активности антиоксидантной системы.. Коэнзим Q10 восстанавливает витамин Е, причем, вследствие своей липофильности, он делает это лучше, чем известный восстановитель токоферола аскорбиновая кислота. Сам коэнзим Q10 в напарниках не нуждается, так как в клетке есть ферментные системы, которые обеспечивают его восстановление.

Коэнзим Q10 усиливает фагоцитарную активность макрофагов, повышает число гранулоцитов в костном мозге и плазме крови, увеличивает количество иммуноглобулинов, поддерживает функцию вилочковой железы, стимулирует процесс кроветворения. Коэнзим Q10, препятствует развитию ишемической болезни сердца, коронарного артериотромбоза, инфаркта миокарда, стимулирует процесс энергетического сжигания жиров, обогащает жировую ткань кислородом, что обеспечивает эффективное снижение веса у тучных людей. Коэнзим Q10 является природным мощным иммуномодулятором, эффективно и быстро восстанавливает недостаточность функций иммунной системы, активизирует антимикробную и противовирусную защиту организма Способность Коэнзима Q10 усиливать иммунитет проявляется при использовании его для лечения парадонтоза и опухолевой болезни, в способности ускорять заживлять поврежденные ткани и тормозить рост злокачественных клеток.

. . Коэнзим Q10 полезен для лечения последствий радиоактивного поражения. Коэнзим Q10 уменьшать токсичность лекарств и поэтому его прменение полезено в курсе лучевой и химиотерапии опухолевых заболеваний, при синдроме хронической усталости, при вторичных иммунодефицитных состояний, при оксидантном стрессе и избыточном весе. Коэнзим Q10 обладает свойствами эффективного геропротектора (защитника от старения). Он способен не только продлить жизнь, но и насытить ее энергией, здоровьем, молодостью, наполнить человека любого возраста ощущением остроты и радости жизни

Коферменты гетероциклического ряда К коферментам гетроциклического ряда относятся производные водорастворимых витаминов: витамина В1 - тиаминпирофосфат (ТПФ), витамина В6 - фосфопиридоксаль ( ФП-СН=О) витамин Н - N-карбоксибиотин витамина В9 - тетрагидрофолиевая кислота (ТГФК)

Тиаминпирофосфат

Тиаминпирофосфат Тиаминпирофосфат (ТПФ) является коферментом окислительных декарбоксилаз альфа-кетокислот (пирувата, альфа-кетоглутарата) и транскетолаз. ТПФ непосредственно или косвенно участвует в синаптической передаче нервных импульсов, ТПФ участвует в синтезе ДНК

Фосфопиридоксаль

Фосфопиридоксаль Фосфопиридоксаль (ФП-СН=О) является коферментом трансаминаз, декарбоксилаз и изомераз аминокислот. Входит в состав моноаминоксидаз и диаминоксидаз биогенных аминов. Является коферментом синтетазы дельта-аминолевулиновой кислоты и 3-кетодигидросфингозина

Карбоксибиотин

Карбоксибиотин Коферментной формой биотина (витамина Н) является N-карбоксибиотин, который входит в состав ферментов обеспечивающих реакции карбоксилирования: пируваткарбоксилазы, ацетил-КоА-карбоксилазы, пропионил-КоА-карбоксилазы.

тетрагидрофолиевая кислота (ТГФК)

тетрагидрофолиевая кислота (ТГФК) 5,6,7,8- тетрагидрофолиевая кислота (ТГФК) является коферментом ферментов обеспечивающих перенос одноуглеродистых радикалов необходимых для синтеза пуриновых, пиримидиновых оснований, в синтезе глицина из серина и метионина из гомоцистеина, в образовании d-ТМФ из d-УМФ.

Коферменты нуклеотиды Коферменты нуклеотиды можно рассматривать как производные водорастворимых витаминов: витамина РР (В5) - никотинамидадениндинуклеотид (НАД) и никотинамид адениндинуклеотид фосфат (НАДФ). витамина В2 - флавинадениндинуклетид (ФАД) и флавинмононуклеотид ( ФМН). витамина В3 - коэнзим А. витамина В12 - метилкобламин ( метил-В12) и дезоксиаденозин кобламин (ДА-В12). Коферментные функции выполняют пуриновые и пиримидиновые нуклеотиды такие как УДФ, ЦДФ, ТТФ, АТФ и другие аналоги.

НАД

Никотинамид адениндинуклеотид (НАД) и никотинамид адениндинуклеотид фосфат (НАДФ) являются производными витамина РР (В5, никотинамид) и служат в качестве кофермента анаэробных дегидрогеназ: изоцитрат дегидрогеназа, лактатдегидрогеназа, малатдегидрогеназа, оксиацил КоА-дегидрогеназы и др. эти ферменты обеспечивают перенос атомов водорода от окисляемого субстрата к любому акцептору кроме кислорода:

НАДФ

ФЛАВИН-АДЕНИН-ДИНУКЛЕОТИД (ФАД) ФЛАВИН-МОНОНУКЛЕОТИД (ФМН) Коферменты ФАД и ФМН являются производными витамина В2 (рибофлавин), являются коферментами аэробных дегидрогеназ: (сукцинатдегидрогеназа, ацил-КоА-дегидрогеназы и др.). Витамин В2 (рибофлавин) и его производные ФАД и ФМН в окисленном состоянии имеют желтую окраску, которая при восстановлении исчезает.

ФАД

ФМН

Коэнзим А Коэнзим А является производным витамина В3 – пантотеновой кислоты CH3 | O=C---CH--C--CH2-OH | | | Н OH CH3 Коэнзим А выполняет коферментную функцию у ацилтрансфераз, катализирующих реакции ацилирования.

Коэнзим А

Не содержащие витамины нуклеотидные коферменты. Коферменты этого типа можно поделить на пять групп в зависимости от типа нуклеозида –аденозиновые, гуанозиновые, уридиловые, цитидиловые и тимидиловые: аденозиндифиосфат (АДФ), гуанозиндифосфат (ГДФ), цитидиндифостфат (ЦДФ), уридиндифосфат (УДФ). Эти коферменты обеспечивают каталитическую активность трансфераз, изомераз и синтетаз.

Металлокоферменты К этой группе коферментов относятся железопорфириновые и колбамидные коферменты. Железопорфириновые гемсодержащие коферменты. Коферменты цитохромов, цитохромоксидазы, каталазы, пероксидазы и некоторых других оксидоредуктаз относятся к железопорфириновым коферментам, в молекуле которых возможен переход ферриформы (Fe+++) в ферроформу (Fe++). Кобламидные коферменты являются производными витамина В12 в структуре которого находится кобальт. Эти коферменты входят в состав ферментов обеспечивающих перенос метильных групп (метил трансфераз) и других одноуглеродистиых радикалов

Гем

Классификация ферментов Согласно международной классификации ферменты делятся на шесть классов по типу катализируемой реакции: 1. Оксидоредуктазы 2. Трансферазы 3. Гидролазы 4. Лиазы 5. Изомеразы 6. Лигазы

1 класс - Оксидоредуктазы. Ферменты этого класса катализируют окислительно-восстановительные реакции, лежащие в основе процессов биологического окисления, осуществляемое реакциями переноса атомов водорода, электронов или кислорода. В этом классе 17 подклассов: 1.1. действуют на =СН-ОН группу 1.2. действуют на =С=О группу 1.3. действуют на -СН=СН- группу 1.4. действуют на =СН-NH2 группу 1.5. действуют на =СН=NH группу 1.6. действуют на НАДН, НАДФН 1.7. действуют на другие азотистые соединения в качестве доноров 1.8. действуют на серосодержащие группы 1.9. действуют на гем 1.10.действуют на дифенолы 1.11.действуют на перекись водорода 1.12.действуют на водород 1.13.действуют на одиночный донор с включением в него молекулярного кислорода (оксигеназы) 1.14.действуют на пару доноров, катализируя включение молекулярного кислорода 1.15.действуют на перекисные радикалы 1.16.окисляют ионы металлов 1.17.действуют на -СН2= группы

2 класс - Трансферазы. Ферменты этого класса катализируют перенос функциональных групп и делятся по этому принципу на 8 подклассов: 2.1. переносит одноуглеродные остатки (метил-, метенил-) 2.2. переносят альдегидные или кетоновые группы 2.3. переносят ацильные (кислотные) остатки 2.4. переносят гликозильные остатки 2.5. переносят алкилные или арильные группы 2.6. переносят азотсодержащие группы (амино- , амидино- и др.) 2.7. переносят фосфорсодержащие группы 2.8. переносят серосодержащие группы (тиогруппы)

3 класс - Гидролазы. Этот класс ферментов катализирует реакции гидролиза, и в зависимости от типа гидролизируемой связи делятся на 11 подклассов: 3.1. гидролиз сложноэфирной связи 3.2. гидролиз гликозидной связи 3.3. гидролиз простой эфирной связи 3.4. гидролиз пептидной связи 3.5. гидролиз не пептидной С-N связи 3.6. гидролиз кислотно-ангидридной связи 3.7. гидролиз С-С связи 3.8. гидролиз галоидной связи 3.9. гидролиз Р-N связи 3.10.гидролиз S-N связи 3.11.гидролиз C-P связи

4 класс - Лиазы. Ферменты этого класса катализируют не гидролитическое разрушение соединений с отщеплением групп (СО2, Н2О, NH2 и др.) от молекулы субстрата. Катализируют также образование двойных связей или присоединение атомов или молекул по месту разрыва двойной связи. В этом классе 7 подклассов, которые делятся по принципу присоединения каких - либо атомов или молекул по месту разрыва следующих связей: 4.1. =С=С= 4.2. =С=О 4.3. =С=N- 4.4. С-S 4.5. С-Р (- С-Сl ) 4.6. Р-О- 4.99. прочие лиазы

5 класс - Изомеразы. Эта группа ферментов катализирует реакции изомеризации, и делятся на 6 подклассов: 5.1. рацемазы и эпимеразы 5.2. цис-транс-изомеразы 5.3. внутри молекулярные оксидоредуктазы 5.4. внутри молекулярные трансфераза 5.5. внутри молекулярные лиазы 5.99.прочие изомеразы

6 класс - Лигазы (синтетазы). Этот класс ферментов катализирует реакции синтеза соединений с использованием энергии АТФ и других аналогичных макроэргов, или с использованием биотина и делятся на 5 подклассов по типу образующихся связей: 6.1. =С=О связи 6.2. =С-S- связи 6.3. =С=N- связи 6.4. -С-С- связи 6.5. фосфоэфирные связи

В каждом классе для структурной организации молекулы фермента используются свои группы коферментов (коэнзимов): - 1 класс оксидоредуктазы - НАД (НАДФ), ФМН (ФАД), убихинон, металлопорфирины (гем), липоевая кислота, глутатион. - 2 класс транcферазы - фосфопиридоксаль (ФП-СН=О), коэнзим А (КоА), тетрагидрофолиевая кислота (ТГФК), цианкобламин, УДФ, ЦДФ. - 4 класс лиазы - ФП-СН=О, КоА, тиаминпирофосфат (ТПФ), цианкобламин, - 5 класс изомеразы - ФП-СН=О, цианкобламин, глутатион. - 6 класс лигазы - УДФ, ЦДФ, биотин, ТГФК Как исключение, ферменты 3 класса (гидролазы) не имеют коферментов

Особенности ферментативного катализа. Ферментативный катализ отличается целым рядов отличительных признаков: 1.Ферменты намного активнее чем неорганические катализаторы. Так химотрипсин в 1 млн. раз превосходит щелочной и кислотный гидролиз белка. Одна молекула каталазы может за 1 минуту разрушить 18 млн. молекул перекиси водорода. 2.Ферментативная реакция идет более "чисто", т.к. фермент катализирует только одну реакцию не влияя на другие. Это свойство ферментов связано с их специфичностью.

Специфичность бывает абсолютная и относительная. Специфичность бывает абсолютная и относительная. Абсолютная специфичность - фермент катализирует превращение только одного субстрата. Например, уреаза катализирует гидролиз только мочевины. Наиболее выражена абсолютная специфичность в виде стериохимической субстратной специфичности - фермент катализирует превращение только одного из всех возможных стериоизомеров одного субстрата. Например, фумараза действует только на фумаровую кислоту и не действует на ее стериоизомер на малеиновую кислоту.

Некоторые ферменты проявляют абсолютную групповую специфичность, катализируя превращение сходной группы субстратов. Например, алкогольдегидрогеназа катализирует превращение не только этилового спирта, но и других алифатических спиртов. Некоторые ферменты проявляют абсолютную групповую специфичность, катализируя превращение сходной группы субстратов. Например, алкогольдегидрогеназа катализирует превращение не только этилового спирта, но и других алифатических спиртов. Относительная специфичность может проявляться в двух вариантах: в форме относительной групповой и в форме относительной субстратной специфичности. Протеолитические ферменты желудочно-кишечного тракта (пепсин, трипсин, химотрипсин и др.) вызывая гидролиз пептидных связей в полипептидных цепях разных белковых молекул, проявляют групповую относительную специфичность. Фермент цитохром Р450, участвуя в гидроксилировании разных соединений, проявляет относительную субстратную специфичность.

Скорость ферментативного катализа зависит от температуры Влияние температуры: Влияние температуры на скорость ферментативной реакции может быть выражена через температурный коэффициент ( Q10) : Скорость реакции при ( Х + 10) град С Q10 = -------------------------------------------------------------- Скорость реакции при Х град С В пределах от 0-40Сo коэффициент Q10 ферментативной реакции равен двум. Иными словами, при каждом повышении температуры на 10 градусов скорость ферментативной реакции удваивается. Температура, обеспечивающая наибольшую активность, называется оптимальной температурой. За пределами этого уровня вследствие наступающей денатурации фермента, скорость реакции снижается до нуля.

Влияние рН-среды: Влияние рН-среды: При постоянной температуре любой фермент проявляет наибольшую активность в определённом диапазоне рН среды. Оптимальным считается то значение рН, при котором реакция протекает с максимальной скоростью. При более низком или более высоком уровне рН активность фермента снижается. Например, оптимум рН среды для пепсина = 2,00, для сахаразы = 4,5, для амилазы слюны = 6,8, для каталаз = 7,6, для липазы = 9,0.

Влияние активаторов и ингибиторов Вещества, повышающие активность ферментов и, следовательно, скорость ферментативной реакции называются активаторами. Ионы металлов, кофакторы ферментов, субстраты могут повышать активность ферментов. Активация ферментов может осуществляться путем химической модификации структуры фермента, т.е. путем превращения неактивного профермента в фермент, путем присоединения какой-либо специфической модифицирующей группы к молекуле фермента, или путем диссоциации неактивного комплекса на активный фермент и связывающий комплекс. Вещества, снижающие активность фермента называются ингибиторами.

Различают обратимое и необратимое ингибирование ферментов. Обратимое ингибирование бывает двух видов: конкурентное и неконкурентное обратимое ингибирование. При определенных условиях при обратимом ингибировании возможно удаление ингибитора и восстановление активности фермента. При конкурентном обратимом ингибировании ингибитор по своей структуре похож на субстрат, легко соединяется с субстратным центром фермента, но не может прореагировать с ним. Находясь в активном центре фермента ингибитор преграждает доступ субстрата к активному центру фермента, как бы конкурируя с ним за активный центр.

Конкурентное обратимое ингибирование. Примером конкурентного обратимого ингибирования может служить ингибирование сукцинатдегидрогеназы малоновой или щавелевоуксусной кислотой, соединениями очень сходными по структуре с янтарной кислотой- субстратом сукцинатдегидрогеназы: СООН СООН СООН | | | СН2 СН2 СН2 | | | СН2 С=О СООН | | СООН СООН янтарная кислота щавелевоуксусная малоновая кислота Конкурентное ингибирование обратимо. Так при увеличении концентрации субстрата скорость ферментативной реакции возрастает. Это связано с тем, что при избытке субстрата ингибитор вытесняется из активного центра фермента.

Неконкурентное обратимое ингибирование Некоторые ингибиторы образуют комплекс не со свободным ферментом, а с фермент субстратным комплексом: ES + J <====> ESJ В этих случаях повышение концентрации субстрата не уменьшает действие ингибитора. Такие ингибиторы называются неконкурентными. Ингибиторы этого типа не родственны по своей структуре субстрату данного фермента. В образования комплекса ESJ участвует не активный центр фермента, а какая-нибудь его часть. Образование комплекса влечет за собой изменение конформации фермента и, хотя субстрат все же присоединяется к ферменту, катализ, тем не менее, оказывается невозможным. Неконкурентным обратимым ингибитором цитохромоксидазы, является цианид, связывающий ионы меди простетической группы этого фермента.

Необратимое ингибирование Необратимое ингибирование вызывается малыми концентрациями ионов тяжелых металлов, например ионов ртути, серебра и мышьяка или иодуксусная кислота, n-хлормеркурибензоат. Необратимое ингибирование ферментов, т.е. инактивацию могут вызвать некоторые структурные аналоги субстратов (3-хлорацетолфосфат инактивирует диоксиацетон фосфатизомеразу) и аналоги коферментов, способные занимать место настоящего кофермента, но неспособные выполнять его функции. Например необратимое ингибирование ацетилхолинэстеразы приводит к накоплению ацетилхолина в холинэргическом синапсе, что сопровождается нарушением проводимости и может завершиться параличем и смертью. Многие лекарственные вещества являются ингибиторами ферментов. Так в лечении ряда заболеваний используются препараты, содержащие ртуть, мышьяк, висмут, которые ингибируют ферменты бaктерий, чем обуславливается их лечебный эффект.

Влияние концентрация субстрата

Влияние концентрации фермента

Регуляция активности ферментов. Метаболические процессы, протекающие в клетке находятся в постоянном равновесии, одновременны, подчинены и определяют физиологическое состояние организма. Направленность и интенсивность метаболических реакций зависит от активности ферментов. Факторы способные изменить активность фермента включаются в процесс регуляции метаболизма. Основными факторами, от которых зависит активность ферментов в клетке являются: - количество фермента, - локализация ферментов в клетке, - изменения уровня рН, температуры, - количество субстрата, - наличие аллостерических эффекторов, активаторов и ингибиторов.

Единицы измерения активности ферментов За международную единицу активности фермента принимается такое его количество, которое катализирует превращение 1 мкмоль вещества за 1 мин в стандартных условиях. Чаще всего в практической биохимии используется удельная активность фермента равная массе фермента (в миллиграммах), способная превратить 1 мкмоль субстрата на 1 мин в стандартных условиях, и выражается в мкмоль / мин мг белка исследуемой ткани или мл (литр) исследуемой биологической жидкости (плазмы крови).

Номенклатура ферментов. В 1961 году специальной комиссией Международного биохимического союза была предложена систематическая номенклатура ферментов. Каждый фермент получил систематическое наименование, точно описывающее катализируемую им реакцию и название субстрата с добавлением суффикса "аза". К систематическому названию фермента добавляется шифр фермента, определяющий класс, подкласс, подподкласс и порядковый номер фермента. Напримет: Креатинфосфокиназа (КФ 2.7.3.3) Рабочее название фермента может складывается из названия субстрата с прибавлением суффикса "аза". Так аргиназа катализирует гидролиз аргинина, липаза гидролиз жира, фосфатаза гидролизует фосфорные эфиры. Другой способ рабочего названия - добавление суффикса "аза" к названию катализируемой ферментом реакции. Например, дегидрогеназа катализирует перенос водорода, гидролаза катализирует гидролиз, трансфераза переносит химические группы и т.д.

Современные подходы к диагностике заболеваний При любых заболеваниях всегда имеет место нарушения различных звеньев обмена веществ, вызванные изменениями активности ферментов. В зависимости от того, какой фермент изменяет свою активность, нарушается соответствующее звено обмена, что приводит к формированию соответствующего патологического процесса. Такой подход к становлению болезни, к сожалению пока не имеет место в клинической практике. Чаще всего для диагностики используются данные об изменении активности органо-специфичных ферментов. Этот подход позволяет только указать место сформировавшегося патологического процесса, не вскрывая механизма его становления. Стратегия функциональной диагностики только что формирующегося патологического процесса, должна строиться из определения статуса конкретных звеньев метаболизма путем выбора соответствующей группы ферментов подлежащих изучению. В этой связи необходимо четко представлять все метаболические пути и ферменты этих путей и своевременно проводить их определение.

1.Ферменты углеводного обмена Дихотомическимй путь катаболизма глюкозы: гексокиназа (фосфоглюкокиназа) фосфорилаза фосфоглюкоизомераза фосфофруктокиназа альдолаза фосфотриозоизомераза глицеральдегид-дегидрогеназа фосфоглицераткиназа фосфоглицеромутаза енолаза пируваткиназа лактатдегидрогеназа Апотомический путь катаболизма глюкозы: глюкоза-6-фосфатдегидрогеназа лактоназа 6-фосфоглюконат дегидрогеназа пентозофосфатизомераза транскетолаза трансальдолаза

Ферменты общих путей катаболизма окислительная декарбоксилаза пирувата цитратсинтетаза аконитаза изоцитратдегидрогеназа -кетоглутарат дегидрогеназа сукцинаттиокиназа сукцинатдегирогеназа фумараза малатдегидрогеназа

Метаболизм гликогена Синтез гликогене и глюконеогенез: УДФ-глюкозилпирофосфорилаза гликогенсинтетаза (гликозилтрансфераза) амило-гликозилтрансфераза пируваткарбоксилаза Фосфоенолпируваткарбоксикиназа Мобилизация гликогена : аденилатциклаза фосфорилазкиназа фосфорилаза протеинкиназа

Превращения олигосахаридов и гликозамингликанов

Ферменты дыхательной цепи митохондрий Биоэнергетика клетки окислительная декарбоксилаза пирувата изоцитратдегидрогеназа -кетоглутарат дегидрогеназа сукцинаттиокиназа сукцинатдегирогеназа малатдегидрогеназа НАДН-дегидрогеназа ФМНН-дегидрогеназа КоQ -редуктаза цитохром-С-оксидаза

Катаболизм триациглицеридов и жирных кислот триацилглицеридлипаза липопротеидлипаза диглицеридлипаза моноглицеридлипаза липопротеинлипаза глицераткиназа -глицерофосфатдегидрогеназа ацил КоА-синтетаза трансацетилаза карнитин-ацилтрансфераза ацил-КоА-дегидрогеназа еноил-КоА-гидратаза гидроксиацил-КоА-дегидрогеназа ацил-КоА-ацилтрансфераза циклооксигеназа липооксигеназа

Анаболизм липидов и биосинтез кетоновых тел и холестерина Анаболизм липидов ацетил КоА-карбоксилаза малонитрансацетилаза цитратлиаза -кетоацил-синтетаза -кетоацил-редуктаза гидроксиацил-гидратаза еноилредуктаза ацилтрансфераза фосфатаза Биосинтез кетоновых тел и холестерина ацетил-КоА-ацетилтрансфераза --гидроксиметилглутарил-КоА-синтетаза гидроксиметилглутарил-КоА-лиаза гидроксибутиратдегидрогеназа ацетоацета-декарбоксилаза --гидроксиметилглутарил-КоА-редуктаза мевалонилфосфокиназа мевалонилпирофосфатдекарбоксилаза

Катаболизм белков и аминокислот пептидазы пищеварительных соков (пепсин, трипсин, химотрипсин) тканевые катепсины трансаминазы глутаматдегидрогеназа АМФ-аминогидролаза гистидаза серин (треонин) дегидротаза оксидаза L-аминокислот декарбоксилаза аминокислот метионин-аденозилтрансфераза метилтрансфераза цистатионинсинтетаза цистатионинлиаза глутаматдекарбоксилаза фенилаланингидроксилаза тирозиназа катехол-О-метилтрансфераза моноаминоксидаза глутаминилтранспептидаза аргиназа NO-синтетаза

Обезвреживание аммиака и синтез мочевины глутаминсинтетаза глутаминаза карбомоилфосфат-синтетаза карбомоилтрансфераз аргининосукцинасинтетаза аргининосукциназа аргиназа

Ферменты обмен нуклеотидов и нуклеиновых кислот нуклеазы (ДНК-аза, РНК-аза) 5`-нуклеотидаза нуклеозидазы АМФ дезаминаза аденозиндезаминаза гуаниндезаминаза цитозиндезаминаза ксантиноксидаза фосфорибозилтрансфераза дигидрооротатдегидрогеназа рибонуклеозидредуктаза тиоредоксинредуктаза

Ферменты метаболизма гемоглобина и антиоксидантной защиты -аминолевулинатсинтетаза -аминолевулинатдегидротаза феррохелотаза гемоглобинредуктаза глютатионредуктаза глютатионпероксидаза супероксидисмутаза 2,3-дифосфоглицератмутаза глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа каталаза пероксидаза