🗊Презентация Тонкослойная хроматография

Тонкослойная хроматография Тонкослойная хроматография – один из наиболее распространенных методов хроматографического анализа Предложен в 1938 г Н.А.Измайловым и М.С. Шрайбер

ОСНОВЫ МЕТОДА Неподвижные фазы - тонкий слой мелкодисперсного адсорбента, нанесенного на стекло, алюминиевую или пластиковую пластинку, и закрепленного при помощи подходящего связующего материала. Анализируемый образец наносят на край хроматографической пластинки капилляром или микропипеткой. Пластинку опускают ее нижним краем в подходящий элюент. Под действием капиллярных сил растворитель поднимается вверх по пластинке, увлекая за собой компоненты анализируемой пробы. Скорости перемещения компонентов пробы будут неодинаковы, так их сродство к данному адсорбенту неодинаково. Каждый из компонентов пробы переместится вдоль пластинки на разное расстояние, Местоположение на пластинке определяют окрашиванием различными способами. Окрашивание разделенных зон различными способами на хроматографической пластинке называют проявлением хроматограммы.

  Неподвижные фазы для ТСХ Неподвижные фазы-адсорбенты – силикагель, оксид алюминия, порошкообразная целлюлоза. Механизм разделения на неподвижных фазах-адсорбентах носит адсорбционный характер, т.е. различие в скоростях перемещения компонентов пробы определяется их различиями в адсорбционной способности. Быстрее движутся вдоль пластинки те вещества, адсорбционные свойства которых к данному сорбенту ниже, и наоборот.

Подвижные фазы для ТСХ В качестве подвижных фаз используют элюенты. Элюенты характеризуются элюирующей силой. Элюирующая сила элюента характеризует силу взаимодействия молекул элюента и неподвижной фазы. Взаимодействие элюента и неподвижной фазы приводит к вытеснению с поверхности неподвижной фазы адсорбированных соединений. Для элюирования соединений с большим сродством к неподвижной фазе необходимы элюенты с большей элюирующей силой. С увеличением полярности растворителя их элюирующая сила в отношении полярных неподвижных фаз (силикагеля, оксида алюминия) возрастает. Элюирующую силу оценивают при помощи специальной шкалы, называемой элюотропным рядом. В качестве подвижной фазы можно использовать одно соединение, либо двух-трехкомпонентную смесь. Смешанные подвижные фазы часто бывают более селективными, а, следовательно, более эффективными.

Получение хроматограмм На хроматографическую пластину на расстоянии 1 см от края карандашом наносят стартовую линию. На стартовую линию микропипеткой или капилляром наносят растворы анализируемых образцов. Диаметр стартового пятна должен быть небольшим(не более 2-5 мм). Пластину помещают в хроматографическую камеру - герметично закрытый стеклянный сосуд, на дно которого налит небольшой слой элюента. Камера должна быть насыщена парами элюента, для предотвращения испарения элюента с поверхности пластины. При установке пластины в камере необходимо следить, чтобы точка нанесения пробы не касалась слоя элюента. Под действием капиллярных сил элюент начинает перемещаться вверх по пластинке. Хроматографирование прекращают, когда фронт элюента достигнет противоположного края пластины.

Способы получения хроматограмм

Проявление или детектирование хроматограммы Физический способ. Хроматограмму освещают ультрафиолетовой лампой. Зоны сорбента, где находятся разделенные компоненты пробы, начинают флуоресцеировать, для четкого фиксирования положения пятен их следует обвести карандашом. Кроме того, на сегодняшний день промышленность выпускает пластинки, в тонкий слой сорбента которых добавлены флуоресцирующие вещества. Под действием ультрафиолетового света зоны хроматограммы, где находятся разделенные компоненты, проявляются как темные синие пятна, вследствие тушения флуоресценции. Химический способ. Пластину опрыскивают реагентами, образующими с разделяемыми веществами окрашенные соединения. Применяют универсальные и специфичные реагенты. Универсальные реагенты – концентрированные растворы серной, азотной кислот, пары иода. Применяются для детектирования большинства органических соединений. Специфические реагенты образуют окрашенные продукты с соединениями определенного класса.

Идентификация веществ на хроматограмме Хроматографическим параметром определяемых веществ, применяемым в ТСХ для идентификации, является величина Rf.  

Идентификация веществ на хроматограмме Хроматографирование в присутствии свидетеля Свидетель - стандартное вещество (т.е. точно известного строения), наличие которого предполагают в пробе. Пробу вещества свидетеля наносят на одну пластину с анализируемым образцом, и хроматографируют. При совпадении величин Rf вещества свидетеля и компонента анализируемой смеси, утверждают, что эти вещества могут быть идентичными.

Количественный анализ в ТСХ

Общая оценка метода Один из важнейших методов анализа в аналитической химии. Непревзойденный метод анализа сложных смесей, прост по методике, экспрессный, не требует больших количеств анализируемого вещества и сложной аппаратуры. Единственный метод обзорного анализа, применимый в самых разнообразных областях науки и производства. Позволяет проводить одновременный анализ нескольких проб на одной пластинке. Метод позволяет: Разделять сложные смеси веществ. Оценивать однородность анализируемых веществ. Идентифицировать вещества в сложных смесях. Проводить количественные измерения веществ.