🗊Презентация Определение содержания гемоглобина по методу Сали. Лабораторная работа № 3

Лабораторная работа №3 Определение содержания гемоглобина по методу Сали

Оборудование и реактивы - гемометр Сали, - капиллярная пипетка от гемометра Сали, - глазная пипетка, - стеклянная палочка, - часовое стекло, - 0,1 н. раствор соляной кислоты, - дистиллированная вод, - фотоэлектроколориметр (ФЭК) или спектрофотометр с зеленым светофильтром и кюветами толщиной 1 см; - химические пробирки с пробками; - капиллярная пипетка от гемометра Сали объемом 20 мкл; - градуированная пипетка на 5 мл; - раствор Драбкина.

Гемоглобин - это дыхательный пигмент, содержащийся в эритроцитах. Его количество в организме выражается в г/л и имеет важное диагностическое значение. Определять содержание гемоглобина можно двумя способами: по Сали и цианметгемоглобиновым методом. Гемоглобин - это дыхательный пигмент, содержащийся в эритроцитах. Его количество в организме выражается в г/л и имеет важное диагностическое значение. Определять содержание гемоглобина можно двумя способами: по Сали и цианметгемоглобиновым методом. Наиболее распространенным и простым является метод определения гемоглобина по Сали. Однако он дает ряд объективных (постепенное усиление окраски) и субъективных (визуальное сравнение цвета) ошибок. Цианметгемоглобиновый метод является наиболее точным.

Метод определения гемоглобина по Сали Приготовление 0,1 н. раствора соляной кислоты: - на 1 л дистиллированной воды добавляют химически чистой 8,2 куб. см соляной кислоты с удельным весом 1,19 либо 0,1 н. фиксанал соляной кислоты.

Ход определения и учет результатов В градуированную пипетку гемометра Сали до метки "2" глазной пипеткой наливают децинормальный раствор соляной кислоты. В капиллярную пипетку от гемометра Сали набирают кровь до метки 20 мкл и выдувают ее в раствор соляной кислоты. Полученную смесь перемешивают стеклянной палочкой и оставляют на 10 минут. По истечении этого времени в пробирку по каплям доливают дистиллированную воду и, перемешивая стеклянной палочкой, подбирают цвет рабочего раствора до совпадения с цветом жидкости в стандартных пробирках. Количество гемоглобина отсчитывают по нижнему мениску рабочего раствора на градуированной пробирке (показатели в г % выражают в г/л), 1 г % равен 10 г/л.

Цианметгемоглобиновый фотометрический метод Приготовление раствора Драбкина, на 1 л реактива берут: Бикарбонат натрия - 1 г, красная кровяная соль - 0,2 г, цианистый калий или натрий - 0,05 г, дистиллированная вода - остальной объем.

Ход определения и учет результатов Мерной пипеткой в пробирку наливают 5 мл трансформирующего раствора Драбкина. Пипеткой от гемометра Сали добавляют 20 мкл крови. Содержимое пробирки хорошо перемешивают и оставляют в холодильнике на 20 минут. По истечении этого времени рабочий и трансформирующий растворы наливают в кюветы и, используя зеленый светофильтр, проводят измерения на ФЭКе. Расчет концентрации гемоглобина (г/л) на основе данного определения проводят по формуле: Х = х 367,1 г/л, где: - показания ФЭК; 367,1 - коэффициент пересчета, учитывающий разведение крови, миллимолярный вес гемоглобина и другие показатели.

Определение гематокритной величины Гематокритное число - это отношение объема эритроцитов к общему объему крови, выраженное в л/л (1 л/л равен 100%). 1. Подготовка к исследованию Приготовление растворов антикоагулянта: - раствор Геллера и Пауля: на 100 мл воды: щавелевокислый аммоний - 1,2 г, щавелевокислый калий - 0,8 г; - 5% раствор трехзамещенного лимоннокислого натрия.

2. Ход определения и учет результатов Микрокапилляры предварительно обрабатывают одним из растворов антикоагулянта. Можно несколько раз сполоснуть их раствором гепарина и высушить при комнатной температуре или же в капилляры насасывают на 1/10 часть раствора Геллера и Пауля и высушивают в сушильном шкафу при 60 °С. В подготовленные таким образом капилляры набирают кровь. Конец капилляра закупоривают с помощью замазки и ставят центрифугировать до получения постоянного объема эритроцитов. Время центрифугирования зависит от скорости вращения центрифуги. Достигают эффекта полного осаждения эритроцитов. Отсчет объема эритроцитов и плазмы производят при помощи миллиметровой линейки. Процентное отношение столба эритроцитов к высоте всего столба крови является гематокритной величиной, которое переводят в размерность л/л.

Определение белка в сыворотке крови Содержание белка в сыворотке крови рыб служит экспресс-тестом для определения уровня физиологического состояния рыб при выращивании в современных рыбоводных хозяйствах. Концентрацию белка выражают в г % или в г/л; 1 г/л равен 10 г %.

Ход определения и учет результатов 2 - 3 мл крови помещают в подготовленные уленгутки или небольшие пробирки. После этого кровь центрифугируют 5 минут при 3000 об./мин. В случае отсутствия центрифуги проводят отстаивание крови в холодильнике 30 - 45 минут. Полученная после центрифугирования или отстаивания сыворотка отсасывается чистой пастеровской пипеткой и несколько ее капель помещают на пластинку рефрактометра. Регистрируют показатель преломления по его шкале. По таблице 1, приведенной ниже, определяют содержание белка в сыворотке крови. После каждого исследования обе поверхности призм протирают марлевым тампоном, смоченным в спирте.

Концентрация белка (в г %) при различном показателе преломления