🗊Презентация Свободнорадикальные процессы в клетке

СВОБОДНОРАДИКАЛЬНЫЕ ПРОЦЕССЫ В КЛЕТКЕ

Радикалы Свободный радикал - это молекулярная частица (атом или молекула), имеющая на внешней электронной оболочке один или несколько неспаренных электронов. Радикалы обладают высокой реакционной способностью: стремятся вернуть себе недостающий электрон, отняв его от окружающих молекул; или избавляются от «лишнего» электрона, отдавая его другим молекулам.  

Молекула кислорода (диоксиген) содержит на внешней оболочке два неспаренных электрона. Диоксиген – это бирадикал и, подобно другим радикалам, обладает высокой реакционной способностью.

Неспаренный электрон в радикалах принято обозначать точкой. Радикал гидроксила - HO˙, радикал пероксида водорода - HOO˙, радикал супероксида- OO˙- или O2˙-.

Все радикалы, образующиеся в организме, можно разделить на: природные и чужеродные; первичные (могут быть полезными), вторичные (чаще повреждающие) и третичные (радикалы антиоксидантов).

Образование и роль биорадикалов У всех аэробных организмов супероксидный анион-радикал кислорода, гидроксильный радикал, пероксид водорода, монооксид азота и другие являются обычными метаболитами, образующимися в нормально функциони- рующих клетках. Образующиеся радикалы взаимодействуют между собой и с другими молекулами и ионами, это продуцирует новые токсические продукты.

Пути образования биорадикалов в организме можно разделить на две группы: физиологически значимые пути; нефизиологические пути. Деление очень относительное. 1. Физиологические пути. К образованию анион-радикала кислорода и пероксида водорода, ведет «дыхательный взрыв» (увеличение потребления кислорода нейтрофилами, макрофагами и др.). В пероксисомах оксидазы воостанавливают кислород до пероксида водорода (уратоксидаза, гликолатоксидаза, оксидаза L-аминокислот). Эти радикалы и активные формы кислорода (АФК) обладают бактерицидным действия.

Физиологические механизмы реализации бактерицидного действия АФК: участие в образовании активных оксидантов в реакции Хабера- Вейса. Вносят небольшой вклад.

вовлечение пероксида водорода в реакции, катализируемые миелопероксидазой (МПО), в результате образуюся активные формы хлора, в первую очередь, гипохлорит. Гипохлорит является чрезвычайно эффективным бактерицидным агентом, способным разрушить бактериальные стенки, основной бактерицидный агент нейтрофилов. Т.о., образование гипохлорита под действием МПО играет важную роль в процессах неспецифи-ческого иммунитета и, в частности, фагоцитоза.

реакция анион-радикала кислорода с моноокисдом азота и образование пероксинитрита. NO образуется из L- аргинина в результате ферментативной реакции, катализируемой NO-синтетазой. Пероксинитрит является важным цитотоксическим агентом, продуцируемым макрофагами. К физиологическим механизмам можно также отнести продукцию АФК при работе липоокси-геназ и циклооксигеназ.

Кроме бактерицидного действия ˙ОН участвует в сборке и разборке биологических мембран, запуске митогенеза, процессах клеточной пролиферации и дифференцировки, деградации белков. Н₂О₂ принимает участие в действии инсулина и сам обладает инсулиноподобным действием. АФК нужны для протекания ПОЛ в стационарном режиме, выполняют сигнальную и адаптационную функции - являются вторичными последниками в передаче гормональных сигналов.

2. Механизмы нефизиологической продукции биорадикалов в оганизме: 2. Механизмы нефизиологической продукции биорадикалов в оганизме: окисление органических соединений, в первую очередь фенолов и полифенолов; утечка электронов с компонентов электронтранспортных цепей (митохондриальной, ЭПР) при переносе на кислород; биотрансформация и токсификация некоторых ксенобиотиков монооксигеназами и другими оксидоредуктазами; спонтанное окисление нейромедиаторов; при переходе оксигемоглобина в гемоглобин.

Образование АФК в организме происходит под действием: ионизирующей радиации; ультрафиолетового излучения; магнитного и электрического полей; гипероксидации и др. Количество АФК возрастает при переломах, ожогах, обморожениях, старении...

Окислительный стресс (оксидативный стресс, от англ. oxidative stress) — процесс повреждения клетки в результате окисления.  Оксидативный стресс вызывается массированным образованием свободных радикалов. Среди отрицательных последствий оксидативного стресса — повреждение органов и систем.

Модификация нуклеиновых кислот АФК

Окислительная модификация ДНК

Участие углеводов и белков в оксидативном стрессе

Взаимодействие белков, липидов и углеводов при оксидативном стрессе

Важное значение играет процесс, протекающий в организме под действием свободных радикалов – процесс перекисного окисления липидов (ПОЛ) В результате ПОЛ образуются гидропероксиды липидов. Подвергаясь дальнейшим превращениям, особенно в присутствии железа (II), они приводят к образованию альдегидов, диальдегидов, кетонов, кислот, эпоксидов и др. высокореакционных соединений. При выходе процессов ПОЛ из под контроля продукты ПОЛ способны, реагируя с биомолекулами, привести к полному распаду клеточных мембран и клетки в целом.

Повреждающие эффекты продуктов ПОЛ HNE – гидроксиноненали ( диальдегиды)

Потеря контроля над АФК в организме и развитие оксидативного стресса, способствует появлению более 100 различных заболеваний. Начинается разрушительная цепная реакция, которая губительно действует на живые клетки. В результате организм начинает преждевременно СТАРЕТЬ, развиваются патологические изменения, которые могут стать причиной: рака, возникшего из-за экзогенных факторов; гипертонической болезни; ишемической болезни сердца и мозга, артериосклероза ( вызывать коронарные, церебральные, периферические нарушения кровообращения); легочных заболеваний (хронический, обструктивный бронхит, бронхиальная астма); диабета, ослабления зрения, памяти и др. Ученые предполагают, что начальной стадией многих заболеваний – от простого кашля до онкозаболевания – является именно большое количество свободных радикалов в организме, снижение антиоксидантной защиты.

Баланс АФК в живых клетках Баланс АФК в живых клетках

Антиоксидантная система Природа создала сложную антиоксидантную систему, способную нейтрализовать свободные радикалы, возникающие в результате обмена веществ, и избежать оксидативного стресса. Биооксиданты обладают способностью реагировать с активными формами кислорода, пероксидными радикалами липидов, инактивировать их и, таким образом, обрывать цепи свободнорадикального окисления.

 Факторы антиоксидантной защиты клеток Единой универсальной классификации антиоксидантов нет. Высказывается точка зрения о нескольких уровнях защиты клеток макроорганизма от активных форм кислорода (Петрович Ю.А., Гуткин Д.В.,1986): 1-й уровень - системная защита клеток за счет значительного снижения напряжения O2 в тканях по сравнению с атмосферным воздухом; 2-й уровень - обеспечивается в процессе четырехэлектронного восстановления основной массы внутриклеточного O2 при участии цитохромоксидазы без освобождения свободных радикалов; 3-й уровень - ферментативное удаление образовавшихся супероксидного анион-радикала и H2O2; 4-й уровень - наличие ловушек свободных радикалов (антиоксидантов); 5-й уровень - ферментативное восстановление гидропероксидов полиненасыщенных жирных кислот. Число эндогенных соединений, относимых к антиоксидантам, постоянно возрастает.

Некоторыми авторами предпринята следующая попытка классификации антиоксидантов (2 группы). 1. Высокомолекулярные соединения: - ферменты антиоксидантной защиты – СОД, церулоплазмин, каталаза, глутатионзависимые ферменты, обеспечивают комплексную антирадикальную защиту биополимеров. Для ферментативных антиоксидантов характерны высокая специфичность, строго определенная органная и клеточная локализация, а также использование в качестве катализаторов металлов Cu, Fe, Mn, Zn, Se (Меньшикова Б.Е., Зенков Н.К., 1993);

белки, способные связывать ионы Fe и Cu, являющиеся катализаторами свободнорадикальных процессов. К их числу относят альбумины крови, трансферрин, ферритин, лактоферрин. Белки-восстановители - тиоредоксин и др. Многие из них весьма эффективны, но слабо проникают через мембраны и тканевые барьеры (Белизи С. и соавт., 1997; Синичкин А.Н., 1997; Синичкин А.А., Медведева И.А., Маслова М.Н., 1997; Кошпаева Е.С., 1997). 2. Низкомолекулярные антиоксиданты: некоторые аминокислоты, полиамины, мочевина, глутатион, аскорбиновая кислота, билирубин, -токоферол, витамины группы A, K, Р, убихинон, изофлавоны и др. (Соколовский В.В., 1988, Кения М.В., Лукиш А.И., Гуськов Е.П.,1993).

Ферментативная защита Супероксиддисмутаза (СОД; КФ 1.15.1.1.) катализирует реакцию восстановления анион радикала кислорода (·О2-) до пероксида водорода, т.о. она является ключевым ферментом антиоксидантной системы аэробных организмов. 2·О2- + 2H+ → H2O2 + O2

В клетках эукариот СОД имеет несколько форм: а) медь и цинксодержащая СОД – локализована в цитозоле, межмембранном пространстве митохондрий, лизосомах и пероксисомах; б) марганецсодержащая СОД – локализована в матриксе митохондрий и у прокариотов; в) позднее был выявлен и железосодержащий фермент, встречающийся только у прокариотов; г) экстрацеллюлярная форма СОД – функционирует в плазме крови, лимфе и синовиальной жидкости.

Каталаза (Кат.; КФ 1.11.1.6) обладает свойствами разлагать пероксид водорода по двум путям: каталазному или пероксидазному. В обоих случаях процесс идёт через образование промежуточного фермент-субстратного комплекса (компл.1). Кат.+Fe3+ + Н2О2 к1 (компл.1) Компл.1 + Н2О2 к2 Кат.-Fe3+ + 2Н2О + O2 Компл.1 + AН2 к2Кат.-Fe3+ + 2Н2О + A В первом случае (каталазный путь– реакции 1, 2), разложение 2-х молекул Н2О2 идет с образованием Н2О и триплетного кислорода. Во втором (пероксидазный путь – реакции 1, 3), одна молекула Н2О2 образует фермент-субстратный комплекс (компл.1) и окисляет донор водорода (АН2). В качестве доноров водорода могут выступать одноатомные спирты, органические доноры водорода, ксенобиотики, например, аминобифенилы и др.

Пероксидазы — подкласс геминовых ферментов. Восстанавливают пероксид водорода до H2O, при этом обязательно идет окисление восстановителя. Наиболее активна глутатионпероксидаза (селен содержащий фермент). Донором водорода (вторым субстратом) является глутатион — γ-глутамил-цистеил-глицин. 2Н2О2 + 2Г-SH—> H2O + Г-S-S-Г Г-SH – восстановленный глутатион, Г-S-S-Г – окисленный глутатион. Регенерация глутатиона идет с участием НАДФН+Н+ и глутатион-редуктазы. Г-S-S-Г + НАДФН+Н+ —> 2Г-SH + НАДФ+.

Наряду с «классической» селен-зависимой глутатионпероксидазой, в организме присутствует ряд других ферментов, выполняющих сходную функцию, это – глутатионтрансферазы (КФ 2.5.1.18). Они катализируют реакции конъюгации глутатиона с многочисленными электрофильными субстратами и реакции восстановления органических гидропероксидов, включая пероксиды фосфолипидов, эндопероксиды (эпоксиды). Неактивны в отношении гидропероксида водорода.

Важную роль в поддержании редокс-баланса в клетке играют - тиоредоксины, глутаредоксины и пероксиредоксины.

Тиоредоксины (TRX) – полифункциональные низкомолекулярные белки, имеющие в своей структуре двухцистеиновый участок и образующие при окислении внутримолекулярную дисульфидную связь. Мощные антиоксиданты, регуляторы апоптоза, метатической активности клеток др. Восстанавливают каталитическую активность пероксиредоксинов и гултатионпероксидаз. Способны восстанавливать Н2О2 и окисленный глутатион, играют роль «ловушки» ˙ОН радикалов.

Пероксиредоксины (тиоредоксиновые пероксидазы)— широкораспространенное семейство неселеновых антиоксидантных ферментов. В отличие от тиоредоксинов, не имеют двухцистеиновых участков. Остатки цистеинов, присутствующие в структуре пероксиредоксинов , способны образовывать межмолекулярные дисульфидные связи.

Главная функция пероксиредоксинов – восстановление и детоксикация Н2О2, органических гидропероксидов и пероксинитрита. У млекопитающих, например, контролируют уровень цитокин-индуцированных пероксидов, участвующих в передаче клеточных сигналов.

Глутаредоксины – Г-SH-зависимые полифункциональные оксидоредуктазы с низкой молекулярной массой (9-14 kДa). В отличие от тиоредоксинов имеют высокую степень гомологии аминокислотной последовательности, особенно в области активного центра. Функционально сопряжены с работой глутатионредуктазы и с соотношением Г-SH/ГS-SГ. Также как тиоредоксины и пероксиредоксины, играют важную роль в поддержании клеточного редокс-гомеостазиса. Обезвреживают АФК, участвуют в регуляции пролиферации, дифференцировки и апоптоза.

Неферментативные компоненты антиоксидантной системы По механизму действия могут быть классифицированы на следующие группы: классические антиоксиданты (обрывающие цепь агенты); ловушки инициаторов свободнорадикальных реакций; хелаторы (железосвязывающие агенты); кофакторы и низкомолекулярные компоненты защитных антиокислительных ферментов и их предшественники.

Витамин Е (токоферол) Токоферолы участвуют в процессе разрушения свободных радикалов в клетках и регулируют интенсивность процессов перекисного окисления липидов на различных уровнях организации живых систем. Наиболее активные антиокислители. α-токоферол

α-Токоферол способен реагировать с АФК и радикалами жирных кислот. В реакции принимает участие ОН-группа фенольного ядра, способная окисляться, отдавая электрон, с образованием малоактивного свободного радикала: Синергистом является витамин С. Аскорбат восстанавливает токоферол, превращаясь в дегидроаскорбат, последний восстанавливается аскорбатредуктазой.

Витамин С (аскорбиновая кислота) Вит.С – наиболее эффективный водорастворимый антиоксидант. В желудке препятствует образованию в кислой среде из нитритов и аминов нитрозоаминов, являющихся канцерогенами. Предотвращает разрушение ферментов свободными радикалами, защищает клетки от окисления.

Вит. С участвует в окислительно-восстановительных реакциях, защищая гемоглобин от окисления, способствует синтезу коллагена (реакции гидроксилирования), обеспечивает образование гормонов коры надпочечников, желчных кислот. Его добавляют во многие напитки и пищевые продукты в качестве антиоксиданта и вкусовой добавки.

Витамин А (ретинол) Антиоксидантное действие вит.А и каротиноидов направлено на предотвращение кератинизации эпителия. Кератинизация обуславливается окислением SH-содержащих белков с образованием в них поперечных сшивок S-S связей между отдельными аминокислотами. Вит.А способствует поддержанию SH-групп в восстановленном состоянии. Усиливает антиоксидантное действие токоферола.

Флавоноиды эффективно нейтрализуют радикалы, благодаря наличию гидроксильных и карбонильных групп. Способны акцептировать свободные радикалы и хелатировать ионы металлов переменной валентности с образованием комплексов. Наиболее известны кверцетин, морин, таксифолин, силибины и др. Стимулируют выработку антиоксидантов самим организмом. Благодаря их присутствию, красное вино – хороший антиоксидант (можно регулярно принимать в небольших количествах), например помогает предотвращать сердечные приступы. В поддержании физиологических значений АФК большой вклад вносят тиолсодержащие молекулы: глутатион, серосодержащие аминокислоты.

Убихинон (коэнзим Q) обладает антиоксидантной активностью, образуя окислительно-восстановительную систему убихинол-убихинон. Его важнейшая биологическая роль определяется участием в митохондриальной электрон-транспортной цепи в качестве кофермента. Антиоксидантные свойства: восстановленная форма (убихинол) может реагировать с пероксильным радикалом, препятствуя образованию алкильных радикалов, что ведет к обрыву цепи ПОЛ;

обеспечивает эффективную защиту мембранных липидов, белков и ДНК от действия АФК; восстанавливает витамин Е, взаимодействуя с его токофероксильным радикалом; Убихинон вляется единственным липидорастворимым антиоксидантом, который синтезируется в клетках и постоянно регенерируется из окисленной формы с помощью ферментных систем организма.

Высокая антиокислительная активность выявлена у некоторых гормонов, в частности, содержащих фенольную группу эстрогенов (женских половых гормонов) - эстрадиола, эстриола и эстрона. Химическая модификация этих соединений и исследование антиокислительного и защитного действия полученных производных при развитии окислительного стресса – перспективное направление по созданию новых антиоксидантов, более эффективных, чем их эндогенные аналоги. Мелатонин - связывает жиро- и водорастворимые радикалы.

Выраженной биологической активностью обладают синтетические хиноны, например производные о-бензохинона. Эти соединения оказывают хороший защитный эффект в условиях ишемии головного мозга, сердца, почек. Они легко восстанавливаются компонентами электрон-транспортной цепи митохондрий и микросом в диоксибензолы, способные легко отдавать атомы водорода гидроксильных групп на восстановление радикалов.

Эффективными антиоксидантами являются транспортеры металлов переменной валентности (цеоулоплазмин, трансферрины, в частности лактоферрин и др.). На их основе разрабатываются новые лекарственные препараты, обладающие антиоксидантными свойствами в сочетании низким токсическим действием.

Церулоплазмин - медная оксидаза, медьсодержащий белок плазмы крови, играющий важную роль в метаболизме меди и железа.  Полифункционален, обладает антиоксидантными свойствами, способен разрушать супероксидные радикалы кислорода, предотвращая активацию ПОЛ. К внеклеточным антиоксидантам относятся транспортеры железа и железо-связывающие белки – трансферрин, лактоферрин и др. Находясь в составе указанных протеинов, железо не катализирует свободнорадикальные процессы.