🗊Презентация Способы взятия крови у рыб. Взятие крови у рыб. Тема 2. Лабораторная работа № 2

Лабораторная работа №2 Тема 2. Способы взятия крови у рыб

Оборудование и реактивы: - шприц с инъекционными иглами - стерильные, - пастеровские пипетки - стерильные, - часовое стекло, - 5% раствор натрия цитрата или 0,2% раствор гепарина (1.000 ЕД/мл), - анестетики, - спирт, - марля, вата.

Кровь берут у голодной рыбы, выдержанной в хорошо аэрированной воде в течение 5 - 10 минут после отлова. Если это невозможно, то пойманную рыбу следует сразу помещать в ведро с водой из водоема в соотношении 1:10, содержащей релаксирующую концентрацию одного из анестетиков: Кровь берут у голодной рыбы, выдержанной в хорошо аэрированной воде в течение 5 - 10 минут после отлова. Если это невозможно, то пойманную рыбу следует сразу помещать в ведро с водой из водоема в соотношении 1:10, содержащей релаксирующую концентрацию одного из анестетиков: пропаксат (0,6 - 0,8 мг/л), хиналдин (25 - 30 мг/л), серный эфир (1 - 1,5%) и др. Вода, в которой находится анестезированная рыба, должна постоянно аэрироваться. В зависимости от размера объекта и необходимого количества крови кровь берут несколькими способами: из сердца, жаберной вены, хвостовой артерии, отсечением хвоста.

Место пункции после снятия чешуи обрабатывают 70° спиртом и высушивают ватным тампоном для удаления слизи. Для взятия крови чаще используют шприц с инъекционной иглой либо пастеровскую пипетку. Инструменты предварительно обрабатывают водным раствором антикоагулянтов: цитрата натрия или гепарина. Место взятия крови нельзя сжимать во избежание попадания тканевой жидкости, искажающей результаты. Повторно брать кровь из одного и того же места не рекомендуется. Место пункции после снятия чешуи обрабатывают 70° спиртом и высушивают ватным тампоном для удаления слизи. Для взятия крови чаще используют шприц с инъекционной иглой либо пастеровскую пипетку. Инструменты предварительно обрабатывают водным раствором антикоагулянтов: цитрата натрия или гепарина. Место взятия крови нельзя сжимать во избежание попадания тканевой жидкости, искажающей результаты. Повторно брать кровь из одного и того же места не рекомендуется. Анализируемая кровь должна быть свежей, жидкой. Во избежание разрушения эритроцитов (гемолиза) кровь берут в подготовленные пробирки (или часовое стекло), сливая осторожно по стенке.

Приготовление и окраска мазков крови 1. Подготовка предметных стекол: - один конец стекла размером в 1 - 1,5 см шлифуют на наждаке для надписи простым карандашом, - стекла кипятят в 1%-ном растворе двууглекислой соды - 10 мин., - охлаждают и промывают водопроводной, а затем дистиллированной водой - 5 мин., - стекла помещают в слегка подкисленный соляной кислотой раствор дистиллированной воды на 2- 3 мин.; затем дважды промывают дистиллированной водой, высушивают на воздухе или в сушильном шкафу и хранят в смеси спирта с эфиром 1:1. Перед употреблением их вынимают, насухо вытирают чистой салфеткой или фильтровальной бумагой. Они готовы к использованию.

2. Приготовление рабочего раствора краски азур-эозина: 5,5 мл концентрированной краски азур-эозина помещают в 250 мл нейтральной дистиллированной воды и тщательно перемешивают.

3. Ход работы Кровь после взятия (см. п. 2) наносят в виде небольшой капли на заранее приготовленное обезжиренное предметное стекло на расстоянии 1,5 - 2 см от его шлифованного края. Большим и указательным пальцами правой руки берут шлифованное стекло за боковые ребра, ставят на предметное стекло под углом 45° и подвигают тыльной стороной к капле, которая от соприкосновения растекается. Скользящим движением продвигают шлифованное стекло вперед. Кровь должна равномерно распределяться по предметному стеклу в виде мазка. От каждой рыбы готовят не менее двух мазков. После приготовления мазка его высушивают на воздухе в течение 10 - 15 минут.

Подсохшие мазки без фиксации окрашивают по Паппенгейму (Романовскому - Гимза). Первый этап Подсохшие мазки без фиксации окрашивают по Паппенгейму (Романовскому - Гимза). Первый этап - окрашивание и фиксация одновременно раствором Май-Грюнвальда в течение 5 минут, затем промывают нейтральной дистиллированной водой. Второй этап - докрашивание в рабочем растворе Романовского 30 - 40 минут. Качество окраски клеток контролируют под малым увеличением микроскопа. Окрашенные мазки промывают водопроводной водой и высушивают на воздухе.