🗊Презентация Электрофорез белков сыворотки крови

Электрофорез белков сыворотки крови

Роль электрофоретического анализа Определение типа электрофореграммы может подтвердить предполагаемый диагноз, выявить скрытую патологию, следить за ходом лечения Абсолютным показанием для исследования электрофореграммы является подозрение на миеломную болезнь, иммунодефицит. Может быть полезным -для диагностики заболеваний печени, нефротического синдрома, злокачественных новообразований, коллагенозов - при контроле течения заболеваний, при которых нарушается белковый состав сыворотки крови - при скрининге врожденного или приобретенного дефицита или аномалии белков - при снижении содержания общего белка < 60 г/л или повышении > 85 г/л, при снижении концентрации альбумина <35 г/л и при увеличении СОЭ > 25 мм/час

Электрофореграмма при бисальбуминемии Выявляется двойная полоса в зоне альбумина Может быть генетически обусловленной или транзиторной Причины: присутствие препарата, связанного с альбумином, заболевания поджелудочной железы (лизис ферментами)

Электрофореграмма при анальбуминемии

Электрофореграмма при ожогах

Электрофореграмма при дефиците α1 -антитрипсина

Электрофореграмма при остром воспалительном синдроме

Электрофореграмма сыворотки крови при нефротическом синдроме Снижение α2 –глобулинов Нарушение питания Патология печени Внутрисосудистый гемолиз Увеличение α2 –глобулинов (преимущественно за счет гаптоглобина и α2-макроглобулина) Воспаление (сочетается с увеличением α1-глобулинов) Нефротический синдром

Электрофореграмма сыворотки крови и гипертрансферинемией при анемии Уменьшение β-глобулинов -патология печени -дефицит С3-компонента комплемента Увеличение β-глобулинов Увеличение β-глобулинов -Гемолизированная сыворотка ЖДА (за счет трасферрина) повышение С3-компонента комплемента

Электрофореграма сыворотки крови при алкогольном циррозе Слияние β- и γ-фракции (за счет увеличения поликлонального Ig A)

Электрофореграмма сыворотки крови при гипогаммаглобулинемии Физиологическая – у новорожденных Первичный гуморальный иммунодефицит Вторичный – при лечении глюкокортикоидами, иммунодепрессантами, химиотерапии, радиотерапии

Электрофореграмма сыворотки криви при поликлональной гипергаммаглобулинемии Диффузное усиление зоны γ-глобулинов (инфекционные заболевания печени, СПИД, аутоиммунные заболевания)

Электрофореграмма сыворотки крови при олигоклональной гипергаммаглобулинемии Появление нескольких полос (синтез в организме одновременно нескольких типов антител к различным антигенам) Накопление антител при системных ревматических заболеваниях

Электрофореграмма сыворотки крови пожилого пациента с моноклональным компонентом Появление узкой гомогенной полосы У пожилых лиц обнаруживается бессимптомная гаммапатия Встречается миеломе, лимфоме, хроническом лимфолейкозе, болезни Вальденстрема

Электрофореграмма сыворотки крови с дополнительной полосой , обусловленной присутствием фибриногена, и того же образца после обработки тромбином Появление дополнительной полосы может в присутствии фибриногена (необходимо повторное проведение электрофореза после обработки тромбином)

Лабораторные исследования у больных с гиперлипопротеинемиями

Схема изменений на электрофореграмме при различных типах гиперлипопротеинемий

Аполипопротеинемии Заболевания, сопровождающиеся снижением уровня ЛП в сывортке крови: Ан-α-липопротеинемия (гипо-α-липопротеинемия) – врожденное нарушение синтеза апо ЛП АI и АII (у гомозиготов – вместо α-липопротеина – измененный – Тэнжи-ЛП, у гетерозиготов – нормальный и ихзмененный). При электрофорезе – вместо фракции пре-β-ЛП –широкая полоса β -ЛП А-β -липопротеинемия (гипо-β -липопротеинемия) – наследственное нарушение образования β-липопротеинов, пре-β-липопротеинов и ХМ, связанное с нарушением синтеза апо-ЛП В. В сывортке снижены уровни ХС, ФЛ, ТГ. При электрофорезе не обнаруживаются фракции β-липопротеинов и пре-β-липопротеинов

Электрофорез ЛП сыворотки крови

Электрофорез ЛП сыворотки крови В норме β -ЛП – 38,6-69,4% Пре-β -ЛП – 4,4-23,1% α- ЛП – 22,3-53,1% добавочная фракция, соответствующая Лп(а)

Электрофоретическое исследование холестерина липидных фракций сыворотки крови

Липопротеин (а) Липопротеин (а) – липопротеинассоциированный антиген – обогащенная холестерином и белком частица, сходная с ЛПНП. Белковая часть содержит кроме Апо-100 Апо(а) –апапротеин, соединенный с ЛПНП дисульфидным мостиком

Липопротеин (а) Липопротеин (а) подавляет фибринолиз, способствует тромбозу N – до 140 мг/дл у мужчин, до 150 – у женщин Не зависит об возраста, пола, факторов риска (курение, гипертензия, образ жизни) При повышении > 300 мг/дл - двукратное повышение риска ИБС Измерять следует : - при подозрении на атеросклероз, особенно при повышении хсЛПНП - при оценке риска ИБС у лиц среднего возраста - при назначении ггиполипидемической терапии - при отсутсвии эффекта от статинов - для оценки риска рестенозов при ангиопластике - для оценки риска развития сердечно-сосудистых осложнений при СД

Повышение уровня Повышение уровня - при нефротическом синдроме - у больных на гемодиализе - при плохо контролируемом СД - при гипотиреозе - в острой стадии ИМ

Электрофоретическое исследование гемоглобинов Основная форма – HbА (две α–цепи и две –β-цепи) В незначительном количестве – HbА2 (две α–цепи и две –δ-цепи) и HbF (две α–цепи и две –γ-цепи) (У новорожденного 80% HbF, заменяется в течение 1 года жизни) Аномальные Hb HbS – остаток глу β-цепи заменен на вал HbМ – гис, связывающий Fe, заменен другими аминокислотами HbС - остаток глу β-цепи заменен на лиз Другие формы

Значение исследования Hb Для диагностики некоторых форм анемий у взрослых Для скрининга наследственных анемий у новорожденных Для дифференциальной диагностики анемий с другими заболеваниями (печени и др.)

Наследственные гемоглобинопатии Количественные, или талассемии, связанные с уменьшением или полным отсутствием синтеза α– и β-цепей (α- талассемия и β- талассемия) Структурные или качественные, обусловлены синтезом других разновидностей Hb (S, C, E и др.) Смешанные (HbE- β-талассемия, HbS- β-талассемия, HbS- β-талассемия)

Содержание различных форм Hb при гемоглобинопатиях

Схема расположения фракций Hb при электрофорезе гемолизата Кровь берут с антикоагулянтом Гемолизат готовят из отмытых физ р-ром эритроцитов добавлением гемолизирующего реактива Наибольшая подвижность – HbH, затем HbA и HbC HbS – остается в области нанесения Если HbF выше 7%, он может сливаться с гликированным Hb

Электрофореграммы гемолизата при гемоглобинопатиях Электрофорез гемолизата нормального и содержащего HbS

Электрофореграммы гемолизата Электрофорез гемолизата нормального содержащего около 1% HbF

Электрофореграммы гемолизата

Гликированный гемоглобин Гликированный Hb имеет большую катодную подвижность

Гликированный гемоглобин

Изоферменты сыворотки крови ЛДГ

Изоферменты ЛДГ Изоферменты ЛДГ сыворотки крови

Изоферменты ЛДГ ОИМ

Изоферменты ЛДГ Миопатия

Изоферменты ЛДГ Заболевания печени

Изоферменты ЛДГ

Изменение активности ЛДГ и ее фракций

Изменение активности ЛДГ и ее фракций

Щелочная фосфатаза Печеночная – 2 изоформы (L1 и L2), L1 содержится в большом количестве повышается при холестазе, циррозе, вирусном гепатите, метастазах опухолей легких, ЖКТ, лимфомы в печень, большая анодная подвижность L2 (макропеченочная, быстрая), присутствует в меньшем количестве. Повышается при холестазе, при заболеваниях, сопровождающихся желтухой (цирроз, вирусный гепатит, опухолях молочной железы, простаты, легких с метастазами в печень)

Щелочная фосфатаза Костная (В) – секретируется остеобластами, участвует в образовании костного матрикса. Повышается при опухолях молочной железы с метастазами в кости и печень, остеосаркоме, лимфоме, ревматических заболеваниях, гиперфункции паращитовидных желез, рахите Активнось выше у детей и подростков

Щелочная фосфатаза Кишечная (I) около 40% общей активности. Повышается при циррозе, диабете, ХПН Плацентарная (Р) появляется при беременности, максимум – в третьем триместре, бывает при первичном раке яичника, желудка, поджелудочной железы, саркоме и у курильщиков

К рис 25 изо ЩФ +

Изоферменты ЩФ +26-с 44

Изоферменты ЩФ Изоферменты ЩФ больных с ХПН, находяшихся на программном гемодиализе + 27,28

Подвижность изоферментов щелочной фосфатазы

Креатинкиназа + Находится в скелетных мышцах, миокарде, мозге Локализована в цитоплазме (40-45%), митохондриях (20-40%), 15-25% связана с миофибриллами, ЭР Изоферменты КК-ММ – 97-100% КК-МВ - 0-3% при активности 15-500 Е/л 0-4% при активности <500 Е/л КК-ВВ – 0%

Электрофорез изоферментов креатинкиназы сыворотки крови 30 31

Белки ликвора Содержание белка – 0,15-0,35 г/л 20% белков продуцируется клетками ЦНС, 80% - попадает из крови Через ГЭБ проходят в основном белки с небольшой молекулярной массой (альбумин, преальбумин, трансферрин), иммуноглобулинов – не более 3-5% СМЖ необходимо сконцентрировать При сравнении белкового спектра сыворотки крови и ликвора образцы нужно получить с интервалом не более 6 часов Сыворотку развести, чтобы концентрация белка стала одинаковой

Электрофорез белков ликвора 32

Электрофорез белков мочи Разделение в соответствии с электрофоретической подвижностью – не пригоден для характеристики протеинурии (подвижность α1-микроглобулина = подвижности орозомукоида, и т.д.) Разделение в соответствии с молекулярной массой – позволяет разделить белки низкомолекулярные (<67 кДа) – канальцевого происхождения и высокомолекулярные – (>67 кДа) – преимущественно клубочковые Метод основан на взаимодействии белков с детергентом додецилсульфатом натрия (SDS). В этих комплексах все белки приобретают одну и туже конформацию и одинаковый отрицательный заряд на единицу массы. Разделение зависит только от молекулярной массы

Схема расположения белков при электрофорезе мочи 41

Электрофореграмма в SDS-геле белков мочи и белков с известной молекулярной массой 43

Физиологическая протеинурия 44

Преренальная протеинурия 45

Гломерулярная протеинурия 45

Селективная гломерулярная протеинурия 47

Неселективная гломерулярная протеинурия 48

Канальцевая протеинурия 49

Канальцевая протеинурия 50

Смешанная протеинурия 51

Постренальная протеинурия 53

IgG 

Определение фракций белков в моче (примеры) Определение фракций белков в моче должно проводиться после концентрирования и обессоливания образца Метод валидирован проф. Mussap, Genoa ITALY.

Определение фракций белков в моче (примеры)