Аффинная хроматография - презентация, доклад, проект скачать

Нажмите для полного просмотра!

Содержание ▲

Вы можете ознакомиться и скачать презентацию на тему Аффинная хроматография. Доклад-сообщение содержит 12 слайдов. Презентации для любого класса можно скачать бесплатно. Если материал и наш сайт презентаций Mypresentation Вам понравились – поделитесь им с друзьями с помощью социальных кнопок и добавьте в закладки в своем браузере.

Слайды и текст этой презентации

Слайд 1

Описание слайда:

Аффинная хроматография Студент гр. Х-450007 Десятова Евгения

Слайд 2

Описание слайда:

Аффинная хроматография Аффинная хроматография (АХ) представляет собой метод разделения биологических молекул, который основан на различии не физико-химических признаков молекулы (заряда, формы и размера), а специфичности функциональных свойств, отличающих данный фермент от множества других биополимеров. Биологическое взаимодействие между лигандом и молекулой-мишенью может быть результатом образования: Водородных связей Электростатического взаимодействия Ван-дер-Ваальсового взаимодействия Гидрофобного взаимодействия Один шаг аффинной очистки дает огромную экономию времени по сравнению с менее селективными многоступенчатыми процедурами.

Слайд 3

Описание слайда:

Механизм разделения в АХ

Слайд 4

Описание слайда:

Проведение процесса хроматографии В аффинной хроматографии выделяют две фазы: подвижной фазой служит жидкость, неподвижной фазой может быть твердый сорбент. Разделение в аффинной хроматографии обычно проводят на хроматографических колонках в две фазы (адсорбция и десорбция); иногда разделяемую смесь помещают в сосуд с сорбентом и выдерживают до полного связывания исследуемого компонента. Затем сорбент промывают буферным раствором для удаления не связавшихся веществ, после чего десорбируют исследуемый компонент.

Слайд 5

Описание слайда:

Неподвижная фаза Неподвижная фаза в аффинной хроматографии представляет собой специально получаемый сорбент, построенный обычно по схеме: носитель – «ножка» – специфический лиганд. Носителем служит чаще всего сефароза - производное агарозы, имеющее поперечные сшивки. Присоединение к ней лиганда или соединяющего звена («ножки»), содержащих, как правило, аминогруппу, осуществляется после активации сефарозы бромцианом.

Слайд 6

Описание слайда:

Подвижная фаза

Слайд 7

Описание слайда:

Лиганды, используемые в АХ Выбор лиганда для аффинной хроматографии зависит от двух факторов: лиганд должен обладать обратимым сродством к целевому белку; лиганд должен содержать химические группы, через которые он может быть иммобилизован на матрице без нарушения связывающей активности. Лигандами могут служить такие субстраты как крахмал или гликоген, однако их превращение в ходе аффинной хроматографии, катализируемое разделяемым ферментом, постоянно изменяет свойства сорбента. Поэтому, как правило, применяют аналоги субстратов, устойчивые к дальнейшему превращению, т.е. ингибиторы ферментов. Так, для выделения протеиназ используют нерасщепляемые ими пептиды D-аминокислот.

Слайд 8

Описание слайда:

Сорбенты, используемые в АХ Матрица является инертным носителем, с которым лиганд может быть ковалентно или не ковалентно связан. Основные свойства хроматографических матриц: Чрезвычайно низкая неспецифическая адсорбция Открытая пористая структура, обеспечивающая высокую связывающую способность даже для больших биомолекул; Стабильность в диапазоне условий эксперимента, таких как высокий и низкий рН, детергенты и т.д. Сефароза – агароза в форме шариков, демонстрирует многие из этих свойств. Сефарозы изменяют и модифицируют в соответствии с конкретными требованиями разделения. В качестве сорбентов для аффинной хроматографии применяются гели на основе агарозы: сефароза 4В, сефароза СL, аффи-гель.

Слайд 9

Описание слайда:

Разрушение аффинной связи Аффинную связь вещества с сорбентом можно нарушить либо: путем создания неблагоприятных для биоспецифического взаимодействия условий; путем конкурентной аффинной элюции.

Слайд 10

Описание слайда:

Аппаратурное оформление процесса Современный жидкостной хроматограф включает емкости для элюентов, насосы высокого давления, дозатор, хроматографическую колонку, детектор, регистрирующий прибор, систему управления и математической обработки результатов. Колонки для ВЭЖХ изготовляют чаще всего из нержавеющей стальной полированной трубки длиной 10- 25 см и внутренним диаметром 3-5 мм. Для увеличения чувствительности детектора иногда применяют послеколоночную дериватизацию компонентов смеси. Для этого с потоком элюента вводят такие реагенты, которые, взаимодействуя с разделенными веществами, образуют производные с более выраженными свойствами, например, сильнее поглощают в УФ или видимой области спектра или обладают большей флуоресцирующей способностью и т. д. Иногда дериватизацию проводят до хроматографического анализа и разделяют производные, а не исходные вещества.

Слайд 11

Описание слайда:

Некоторые белки, разделяемые АХ Иммуноглобулины Разнообразие антиген – антитело взаимодействий создало множество приложений для антител и их фрагментов. Они используются в терапии, диагностике и научных исследованиях. Использование технологии рекомбинантных ДНК дало возможность манипулировать их свойствами для решения многих задач. Значительным преимуществом для очистки антител и их фрагментов является то, что известно много информации о свойствах молекул – мишеней антител. IgG, фрагменты IgG и подклассы Разделение IgG и его фрагментов основано на высоком сродстве к белку А. Аналогичный белок G связывается с Fc-фрагментом IgG. Белки А и G – это бактериальные протеины (из Staphylococcus aureus и Streptococcus, соответственно) которые на сефарозной матрице образуют чрезвычайно полезный и простой сорбент для многих рутинных процедур.

Слайд 12

Описание слайда:

Заключение «+»: высокая специфичность очень высокая степень очистки препарата – АХ может обеспечить полную очистку продукта из сложной многокомпонентной смеси - культуральной жидкости, экстракта клеток - в одну стадию, в то время как более традиционные методы осаждения и ионообменной хроматографии требуют многоэтапной очистки, сопряженной с большими затратами труда и времени «-»: относительная дороговизна материалов для аффинной хроматографии, в частности, веществ, используемых в качестве лигандов быстрый выход колонки из строя при пропускании через нее смесей, компоненты которых забивают промежутки между гелевыми частицами (именно поэтому в производственных условиях колонки используются в периодическом, а не в непрерывном режиме)

Теги Аффинная хроматография

Похожие презентации