🗊Презентация Полимирезді тізбекті реакция (ПТР)

Дайындаған: Кенжеева М Курс: 6 Тобы: 604-1к Факультет: интерн. Терапия Тексерген: Дуйсенбаева А.Ж

Тізбекті полимеразды реакция Тізбекті полимеразды реакция (полимераза цепная реакция)– бұл молекулалық биологияның  экспериментальді әдісі, биологиялық материалда (сынамада) нуклеин қышқылының (ДНҚ, РНҚ) белгілі фрагменттерінің аз концентрациясын көбірек игеру.

Тізбекті полимеразды реакцияны 1983 жылы Кэри Маллисом ашқан. Оның мақсаты ДНҚ ферментті полимеразаның көмегімен ДНҚ-ны амплицирлеу және ДНҚ-ң алғашқы молекуласының барысымен көптеп екі еселенуі. Тізбекті полимеразды реакцияны 1983 жылы Кэри Маллисом ашқан. Оның мақсаты ДНҚ ферментті полимеразаның көмегімен ДНҚ-ны амплицирлеу және ДНҚ-ң алғашқы молекуласының барысымен көптеп екі еселенуі.

Негізгі қолдану көрсеткіштері: Инфекциялық аурулардың диагностикасы- ГЕПАТИТТІҢ БАРЛЫҚ ТҮРЛЕРІНЕ ТЕКСЕРІЛЕСІЗ. Онкологиялық аурулардың диагностикасы (лейкемиялар және лимфомалар, сүт безі рагі т.б. қатерлі жаңатүзілістер); Генетикалық аурулар диагностикасы; Жеке идентификация (сот медицинасы және криминалистика, мүшелер мен тіндер трансплантациясы, генетикалық тест арқылы әкелікті анықтау ); Тағам патогенділігінің диагностикасы .

ТПР САТЫЛАРЫНЫҢ ЕРЕКШЕЛІКТЕРІ: ТПР 3 негізгі  сатыдан тұрады, 20-40 рет қайталанып отырады. Бұл цикл термоциклді аппаратта жүреді, ол оте аз уақыт ішінде қоспалық реакцияның температурасын жоғарылатады немесе төмендетеді. Денатурация – 94°C жуық: Денатурация кезінде ДНК-ң 2 тізбегі балқиды да бір тізбекті болып  түзіледі. (барлық энзимді реакциялар тоқтайды). Аннеалинг (күйдіру) – 54°C жуық: Сутектік байланысы біртіндеп құралады және  бір тізбекті ДНК мен жалғыз праймерлер арасы бұзылады. Егер праймер ДНҚ-ң комплементарлы аймағында орналасса, праймер матрицада қалып қояды себебі сутектік байланыс өте күшті. Ұзаруы  (элонгация) – 72°C жуық

Әрбір цикл ДНК жібінің санын екі еселендіреді. Әрбір цикл ДНК жібінің санын екі еселендіреді. Бірнеше біріншілік циклдан кейін өнімнің көпшілігі ДНҚ кесіндісіне ұсынылады, олардың ұзындықтары праймерлер арасындағы негізгі көлеммен сәйкес келеді. Нәтижесінде ДНҚ кесіндісінде праймерлер арасындағы түзілістердің  көлемі кенеттен жоғарылайды. 20 циклдан кейін синтезделген ТПР  өнімінің санының көлемі  1 млн. дейін жетеді. 40 циклдан кейін —  1 x 1012

ТПР-дың қасиеті:

Общие рекомендации во взятию биоматериала для ПЦР исследования 1. Различные микроорганизмы имеют свои особенности локализации, пути распространения и выделения, что следует учитывать при выборе места взятия биоматериала. 2. Взятие биоматериала, по возможности, должно проводиться в период обострения инфекции. За несколько дней до исследования необходимо прекратить прием химиопрепаратов. Контроль эффективности лечения должен проводиться не ранее чем через 3-4 недели после окончания терапии.

3. Объём отбираемого биоматериала не должен быть избыточным, т. к. вместе с возбудителем в пробу попадают вещества, которые могут вызывать ингибирование ПЦР или способствовать деградации ДНК при хранении и транспортировке. При взятии мазков и соскобов достаточно получить материал в объёме «спичечной головки». 3. Объём отбираемого биоматериала не должен быть избыточным, т. к. вместе с возбудителем в пробу попадают вещества, которые могут вызывать ингибирование ПЦР или способствовать деградации ДНК при хранении и транспортировке. При взятии мазков и соскобов достаточно получить материал в объёме «спичечной головки». 4. Для взятия проб необходимо пользоваться только одноразовым инструментом и стерильными пластиковыми контейнерами (или пробирками с транспортной средой) с плотно закрывающейся крышкой.

Рекомендации женщинам по подготовке к сдаче мазка на ПЦР, РИФ, посева на флору, микоплазму, трихомонаду, грибковую инфекцию. Нельзя проводить такие исследования в период приема любых антибактериальных препаратов. Эти исследования не сдаются в период менструации и в течение 1-2 дней после её окончания. За 2-3 дня до визита в клинику следует прекратить использование любых влагалищных таблеток, шариков, свеч — и лечебных, и противозачаточных (Фарматекс, Пантекс-Овал, клион Д, Полижинакс и прочие). Накануне вечером и с утра в день взятия мазка не следует подмываться и спринцеваться. ВАЖНО! Нельзя брать мазки на ПЦР после проведения кольпоскопических проб.

Материал из уретры Перед взятием материала пациенту рекомендуется воздержаться от мочеиспускания в течение 1,5-2 часов. Непосредственно перед взятием материала наружное отверстие уретры необходимо обработать тампоном, смоченным стерильным физиологическим раствором. При наличии гнойных выделений соскоб рекомендуется брать через 15-20 мин. после мочеиспускания, при отсутствии выделений необходимо провести массаж уретры с помощью зонда для взятия материала. У женщин перед введением зонда в уретру проводится ее массаж о лобковое сочленение. В уретру у женщин зонд вводится на глубину 1,0-1,5 см, у мужчин — на 3-4 см, и затем делается несколько осторожных вращательных движений. У детей материал для исследования берут только с наружного отверстия уретры. После взятия материала зонд переносят в упаковку зонда, либо вносят в пробирку с транспортной средой и тщательно отмывают, пробирка закрывается и маркируется, после чего материал доставляется в лабораторию.

Материал из цервикального канала Перед взятием материала необходимо удалить ватным тампоном слизь и затем обработать шейку матки стерильным физиологическим раствором. Зонд вводится в цервикальный канал на глубину 0,5-1,5 см, материал собирается осторожными вращательными движениями. При наличии эрозий цервикального канала необходимо их обработать стерильным физиологическим раствором, материал следует брать на границе здоровой и измененной ткани. При извлечении зонда необходимо полностью исключить его касание со стенками влагалища. После взятия материала зонд переносят в упаковку зонда, либо вносят в пробирку с транспортной средой и тщательно отмывают, пробирка закрывается и маркируется, после чего материал доставляется в лабораторию.

Материал из влагалища Материал должен быть взят до проведения мануального . Зеркало перед манипуляцией можно смочить горячей водой, применение антисептиков для обработки зеркала противопоказано. В случае избытка слизи или обильных выделений необходимо удалить их стерильным ватным тампоном. Влагалищное отделяемое собирают стерильным одноразовым зондом из заднего нижнего свода или с патологически измененных участков слизистой. У девочек материал нужно забирать со слизистой оболочки преддверия влагалища, в отдельных случаях — из заднего свода влагалища через гименальные кольца. После взятия материала зонд переносят в упаковку зонда, либо вносят в пробирку с транспортной средой и тщательно отмывают, пробирка закрывается и маркируется, после чего материал доставляется в лабораторию.

Материал с конъюнктивы глаз При наличии обильного гнойного отделяемого его убирают стерильным ватным тампоном, смоченным физиологическим раствором. Соскоб берут с внутренней поверхности нижнего века движением к внутреннему углу глазной щели. При взятии соскоба необходимо придерживать веко руками, чтобы при моргании ресницы не касались зонда. После взятия материала зонд переносят в упаковку зонда, либо зонд вносят в пробирку с транспортной средой и тщательно отмывают, пробирка закрывается, маркируется и доставляется в лабораторию.

Материал с задней стенки глотки Взятие материала проводится натощак или не ранее, чем через 2-4 часа после еды. Одноразовый зонд вводят за мягкое небо в носоглотку и проводят по задней стенке глотки. Если целью исследования являются миндалины, зонд вводится в лакуны миндалин и там ротируется. После взятия материала зонд переносят в упаковку зонда, либо вносят в пробирку с транспортной средой и тщательно отмывают. Пробирка закрывается, маркируется и доставляется в лабораторию.

Материал из носоглотки Взятие материала проводится натощак или не ранее, чем через 2-4 часа после еды. При взятии материала необходимо хорошее освещение, пациент сидит против источника света, корень языка придавливают шпателем, материал берут стерильным зондом, не касаясь языка, слизистой щек и зубов. После взятия материала зонд переносят в упаковку зонда, либо вносят в пробирку с транспортной средой и тщательно отмывают, пробирка закрывается, маркируется и доставляется в лабораторию.

Материал из зубодесневых карманов Мазки из зубодесневого кармана собираются в стерильную пробирку (типа эппендорф) с физиологическим раствором. В этом случае пробирки могут храниться в холодильнике (+4... 6°С) не более 12 часов, а их транспортировка осуществляется в сумке-холодильнике. Можно брать мазки и жесткими уретральными зондами. В этом случае зонд после взятия материала помещают в его одноразовую упаковку, и в таком виде доставляют в лабораторию.

Слюна За 12 часов до взятия (сбора) слюны исключается прием пищи, алкоголя и лекарственных препаратов. Непосредственно перед сбором слюны необходимо исключить использование зубной пасты и удалить зубные протезы. Перед тем, как собрать слюну, необходимо почистить зубы без зубной пасты, затем хорошо прополоскать рот без использования раздражающих средств. Слюну выплевывают или отсасывают со дна рта одноразовым шприцем и переносят в пробирку (типа эппендорф). Слюна может храниться в холодильнике (+4...6°С) не более 12 часов, транспортировка осуществляется без охлаждения.

Ректальные мазки на кишечную группу В прямую кишку вводят стерильный одноразовый зонд, вращательными движениями собирают материал, зонд вынимают и помещают в стерильную пробирку, которую доставляют в лабораторию.

Мокрота После тщательного туалета полости рта (чистка зубов и полоскание кипячёной водой) в стерильную посуду собирают утреннюю порцию мокроты. Диагностическую ценность представляет мокрота слизистого или слизисто-гнойного характера, а также мокрота, содержащая плотные белесоватые включения, и мокрота, окрашенная в желтоватый, серый или бурый цвет. Достаточный для исследования объём мокроты — 3-5 мл. Для повышения информативности возможно повторное (до 3 раз) исследование мокроты, что позволяет повысить число положительных находок. Если мокрота выделяется нерегулярно или в скудном количестве, накануне вечером и рано утром в день сбора мокроты следует применить отхаркивающие препараты или раздражающие ингаляции. Приготовление мазков из материала, полученного таким способом, должно быть произведено в день его сбора. При отсутствии мокроты, невозможности проведения аэрозольной ингаляции или ей безуспешности для исследования на микобактерии следует исследовать промывные воды бронхов или желудка.

Промывные воды желудка Исследуются преимущественно у детей младшего возраста, плохо откашливающих мокроту и часто её проглатывающих. Во избежание смешивания проглоченной мокроты с пищей промывные воды желудка следует брать натощак. Последний приём пищи должен быть не менее чем за 12 часов до взятия промывных вод желудка. Перед взятием материала для нейтрализации содержимого желудка пациент выпивает 100-150 мл раствора питьевой соды (1 чайная ложка на 1 стакан воды) на стерильной дистиллированной воде, после чего в желудок проводят стерильный желудочный зонд и собирают содержимое желудка в стерильный флакон. Материал немедленно доставляют в лабораторию и обрабатывают, что исключает возможное деструктивное влияние желудочных ферментов на возбудителя.

Взятие материала из уретры у мужчин (ПЦР, посевы, мазки).  Накануне таких исследований, как ПЦР диагностика и посевы нельзя: - мочиться 3 часа до взятия материала;  - применять дезинфицирующие растворы; - использовать антибактериальное мыло; - жить половой жизнью менее чем за 36 часов до взятия материала; - применять антибактериальные средства или уросептики внутрь (при необходимости, предупредить об этом).

Взятие материала у женщин (ПЦР, посевы, мазки).  Накануне таких исследований, как ПЦР диагностика, гинекологические мазки и посевы нельзя: - мочиться 3 часа до взятия материала, если берется анализ из уретры; - применять вагинальные дезинфицирующие растворы; - применять любые вагинальные свечи менее чем за 36 часов до взятия материала; - использовать антибактериальное мыло; - жить половой жизнью менее чем за 36 часов до взятия материала; - применять вагинальные антибактериальные средства; - спринцеваться; - применять антибактериальные средства или уросептики внутрь (при необходимости, предупредить об этом); - сдавать анализы во время менструации.