🗊Презентация Серодиагностика сифилиса

Серодиагностика сифилиса

Серологические реакции на сифилис включают в себя: 1.Стандартный комплекс серологических реакций (КСР), включающий: а) реакцию микропреципитации на стекле (экспресс метод); б) реакцию Вассермана (RW) с кардиолипиновым антигеном; в) реакцию Вассермана (RW) с трепонемным антигеном. 2. Реакцию иммунофлюоресценции (РИФ); 3. Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ); 4. Реакцию пассивной гемагглютинации (РПГА); 5. Иммуноферментный анализ (ИФА-L).

В зависимости от выявляемых антител СР подразделяются на: 1.Нетрепонемные реакции 2. Трепонемные реакции

Нетрепонемные реакции Выявляют (АТ), направленные против веществ липоидной природы, высвобождающихся из поврежденных токсинами бледной трепонемы клеток организма, имеющих сходство с липидными (АГ) Treponema pallidum. Эти (АГ) могут являться причиной ложноположительных серологических реакций на сифилис.

Трепонемные реакции Выявляют специфические АТ, направленные непосредственнно против бледных трепонем. К ним относятся все остальные из выше названных серологических реакций.

Микрореакция преципитации на стекле (экспресс метод) Постановка (МРП) осуществляется на стекле с плазмой и сывороткой крови пациента и кардиолипиновым антигеном. Результаты оценивают по количеству выпавшего осадка и величине хлопьев. Выраженность реакции оценивают плюсами: 4+, 3+ и т.д. Преимуществом метода является быстрота получения ответа( 30-40 мин.) Небольшой объем биоматериала материала: 2-3 капли. Недостатками являются ложноположительные результаты в 15% случаев. МРП НЕ ПРИМЕНЯЮТ ДЛЯ ОБСЛЕДОВАНИЯ БЕРЕМЕННЫХ, ДОНОРОВ И ДЛЯ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА ЛЕЧЕНИЯ!!!

Реакция Вассермана (реакция связывания комплемента) с кардиолипиновым и трепонемным антигенами Механизм реакции заключается в связывании данных (АГ)- кардиолипинового и трепонемного с антилипоидными и противотрепонемными (АТ) сыворотки крови больного. Образовавшийся имунный комплекс (АГ+АТ) способен связывать комплемент морской свинки (система белков крови, которая активируется при попадании в организм различных чужеродных материалов, активация системы комплимента запускает иммунный ответ, а в некоторых случаях может привести к разрушению чужеродного организма (бактерия или паразит). В качестве индикатора используется гемолитическая система ( эритроциты барана с гемолитической сывороткой).

Интерпритация: 1.Если в организме присутсвуют антилипоидные и противотрепонемные (АТ), они связываются с кардиолипиновыми и антитрепонемными (АГ). Этот иммунный комплекс связывается с комплементом. Гемолиза эритроцитов не происходит. (Реакция положительная). 2.Если в организме отсутсвуют антилипоидные и противотрепонемные (АТ) , т.к. нет возбудителя, не образутеся иммунный комплекс (АТ+АГ). Комплемент не связывается с иммунным комплексом и находится в свободном состоянии. Происходит гемолиз эритроцитов добавленными нами противотрепонемными и антилипидными (АГ). (Реакция отрицательная).

Результаты: Для обозначения степени выраженности( позитивности) реакции Вассермана пользуются системой четырех плюсов: 4+ полная задержка гемолиза( резкоположительная реакция) 3+ значительная задержка гемолиза ( положительная реакция) 2+ частичная задержка гемолиза ( слабоположительная реакция) 1+ незначительная задержка гемолиза +- сомнительная реакция отрицательный результат реакции характеризуется полным гемолизом

Реакция Вассермана может быть поставлена не только качественно, но количественно, с различными разведениями сыворотки крови( 1:10, 1:20, 1:80, 1:160, 1:320). Титр (АТ) определяется максимальным разведением, еще дающим резкоположительный 4+ результат. Количественное разведение используется для контроля за терапией. КСР в первичном периоде становятся положительными через 3 недели после появления твердого шанкра; во вторичном периоде 10%; в третичном активном у 70-80%; скрытом у 50-60%. Недостатком является то, что КСР могут давать ложноположительные результаты при различных инфекциях(вирусных, бактериальных), малярии, склеродермии, ревматизме и т.д., онкологической патологии, при циррозе печени и д.р. За рубежом RW не используется также вследствие большей трудоемкости и меньшей чувствительности по сравнению с другими методами серодиагностики( РПГА, РИФ и д.р.)

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ) Принцип реакции заключается в связывании антитрепонемных (АТ) исследуемой сыворотки крови больного после реакции с трепонемными (АГ) визуализируются при люминисцентной микроскопии препарата с помощью кроличьей сыворотки против Ig человека, меченой флюорохромом. В нашей стране используют различные модификации РИФ:

РИФ-200- с предварительным разведением исследуемой сыворотки 1:200, что снижает количество ложноположительных реакций. РИФ-ц для диагностики нейросифилиса с использованием спинномозговой жидкости. РИФ-абс-реакция иммунофлюоресценции с абсорбцией, когда групповые (АТ) удаляются из исследуемой сыворотки с помощью абсорбции разрушенными ультразвуком культуральными непатогенными трепонемами.

Результаты Положительными считают сыворотки крови, дающие свечение на 4+, 3+, и 2+: блестящее зелено-желтое свечение оценивается на 4+, яркое на 3+, слабое свечение на 2+. Отрицательными считают сыворотки, которые дают свечение на 1+. РИФ является высокоспецифичным методом. РИФ 99-100% положительна при скрытом сифилисе, 100% положительна при вторичном, 95-00% положительна при третичном и врожденном сифилисе . Необходимое время для постановки результата – 1-2 недели после появления твердого шанкра- является ранним методом серодиагностики сифилиса.

Реакция иммобилизации бледных трепонем (РИБТ). Основана на феномене потери бледными трепонемами подвижности в присутствии специфических противотрепонемных (АТ), имеющихся в сыворотке крови больных сифилисом. В качестве (АГ) используют взвесь бледных трепонем, Полученных из тканей сифилитического орхита кролика. Реакцию ставят в анаэробных условиях.

Результаты Ответ дается в % иммобилизации бледных трепонем: -от 51-100% -положительная реакция, -от 31-50% - слабоположительная реакция, -от21-30% - сомнительная реакция -от 0-20% - отрицательная. Выявляемые РИБТ (АТ)-иммобилизины относятся к поздним противотрепонемным (АТ), поэтому РИБТ не подходит для диагностики первичного сифилиса, но при вторичном, третичном, врожденном сифилисе, нейросифилисе положительна в 95-100% случаев. РИБТ используется для диагностики скрытых и поздних форм сифилиса, распознавания ложноположительных результатов КСР у беременных и соматических больных. РИБТ не применяют когда начата антибактериальная терапия!!!!

Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) Принцип состоит в агглютинации эритроцитов, сенсибилизированных трепонемным (АГ), в присутствии специфических противотрепонемных (АТ) в исследуемой сыворотке. РПГА становится положительной через 3 недели после появления твердого шанкра. РПГА является высокоспецифичным методом. Ложноположительный результат (менее 1%). Занимает лидирующее место среди постановки серологических реакций.

Иммуноферментный анализ (ИФА-L) Принцип реакции заключается в соединении (АГ) бледной трепонемы, сорбированного на поверхности твердофазного носителя, с (АТ) исследуемой сыворотки крови и выявления специфического комплекса (АГ+АТ) с помощью антивидовой иммунной сыворотки, меченой ферментом. Показания к постановке такие же, как для РИФ-абс.

Удачного усвоения материала и применения его на экзамене !!!