Ферментативный микроанализ. Использование в микроанализе ферментных электродов. (Лекция 6)

Нажмите для полного просмотра!

Ферментативный микроанализ. Использование в микроанализе ферментных электродов. (Лекция 6), слайд №2

Ферментативный микроанализ. Использование в микроанализе ферментных электродов. (Лекция 6), слайд №3

Ферментативный микроанализ. Использование в микроанализе ферментных электродов. (Лекция 6), слайд №4

Ферментативный микроанализ. Использование в микроанализе ферментных электродов. (Лекция 6), слайд №5

Ферментативный микроанализ. Использование в микроанализе ферментных электродов. (Лекция 6), слайд №6

Ферментативный микроанализ. Использование в микроанализе ферментных электродов. (Лекция 6), слайд №7

Ферментативный микроанализ. Использование в микроанализе ферментных электродов. (Лекция 6), слайд №8

Ферментативный микроанализ. Использование в микроанализе ферментных электродов. (Лекция 6), слайд №9

Ферментативный микроанализ. Использование в микроанализе ферментных электродов. (Лекция 6), слайд №10

Ферментативный микроанализ. Использование в микроанализе ферментных электродов. (Лекция 6), слайд №11

Ферментативный микроанализ. Использование в микроанализе ферментных электродов. (Лекция 6), слайд №12

Ферментативный микроанализ. Использование в микроанализе ферментных электродов. (Лекция 6), слайд №13

Ферментативный микроанализ. Использование в микроанализе ферментных электродов. (Лекция 6), слайд №14

Ферментативный микроанализ. Использование в микроанализе ферментных электродов. (Лекция 6), слайд №15

Ферментативный микроанализ. Использование в микроанализе ферментных электродов. (Лекция 6), слайд №16

Ферментативный микроанализ. Использование в микроанализе ферментных электродов. (Лекция 6), слайд №17

Ферментативный микроанализ. Использование в микроанализе ферментных электродов. (Лекция 6), слайд №18

Ферментативный микроанализ. Использование в микроанализе ферментных электродов. (Лекция 6), слайд №19

Ферментативный микроанализ. Использование в микроанализе ферментных электродов. (Лекция 6), слайд №20

Ферментативный микроанализ. Использование в микроанализе ферментных электродов. (Лекция 6), слайд №21

Содержание ▲

Вы можете ознакомиться и скачать презентацию на тему Ферментативный микроанализ. Использование в микроанализе ферментных электродов. (Лекция 6). Доклад-сообщение содержит 21 слайдов. Презентации для любого класса можно скачать бесплатно. Если материал и наш сайт презентаций Mypresentation Вам понравились – поделитесь им с друзьями с помощью социальных кнопок и добавьте в закладки в своем браузере.

Слайды и текст этой презентации

Слайд 1

Описание слайда:

ФЕРМЕНТАТИВНЫЙ МИКРОАНАЛИЗ. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ В МИКРОАНАЛИЗЕ ФЕРМЕНТНЫХ ЭЛЕКТРОДОВ

Слайд 2

Описание слайда:

Ферментативный микроанализ Ферменты используются для обнаружения и количественного определения различных веществ: Металлов (Ag, Cu, Hg, Zn и т. д) Органических и неорганических соединений Мутагенов Канцерогенов Метаболитов Детекция количеств, недоступных определению с помощью большинства физико-химических методов. Методы детекции: электрохимический, спектрофотометрический,флуоресцентный, биолюминесцентный.

Слайд 3

Описание слайда:

Почему используют Е в ферментативном микроанализе Специфичность по отношению к S (определение S в многокомпонентной смеси, без ее предварительного разделения на составляющие) Высокая каталитическая активность (катализируют реакции химического превращения субстрата даже при его низких концентрациях, можно определять микроколичества вещества). Ферментативный микроанализ простой и быстрый (не надо разделять смеси или концентрировать анализируемый образец, высокая скорость биокатализа) Многообразие веществ, которые определяются (либо субстраты, либо его эффекторы)

Слайд 4

Описание слайда:

Ферментативный микроанализ Пример: Щелочной фосфатазы используется для детекции нг количеств бериллия. Алкогольдегидрогеназа - ионы серебра (10пг/мл). Пероксидаза и уреаза - ртуть. Холинэстераза или карбоксилэстераза - фосфорсодержащие пестициды определяют п Бактериальная люцифераза -инсектициды (ДДТ, пентахлорфенол).

Слайд 5

Описание слайда:

Кинетическая основа ферментативного микроанализа А→P Начальная скорость этой реакции ϑ0 пропорциональна концентрации исходного вещества [А]. ϑ0=κ[А], где κ–константа скорости реакции. Чем выше концентрация вещества [А], тем больше ϑ0 Концентрацию вещества А определяют с помощью предварительно построенного калибровочного графика, отражающего зависимость ϑ0 от [А]).

Слайд 6

Описание слайда:

Кинетическая основа ферментативного микроанализа Ферментативную реакцию останавливают через определенное время. Зная концентрацию А и измерив концентрацию образовавшегося Р, можно построить калибровочный график, описывающий зависимость [Р] от [А]. Пределы обнаружения анализируемых соединений определяются не только каталитической активностью фермента, но и другими кинетическими параметрами индикаторной реакции.

Слайд 7

Описание слайда:

Кинетическая основа ферментативного микроанализа при определении концентрации S E + S ↔ES →P + E где Е – фермент, S – субстрат, ES – фермент-субстратный комплекс, Р –продукт. При [E]

Слайд 8

Описание слайда:

Кинетическая основа ферментативного микроанализа при определении концентрации S Согласно уравнению Михаэлиса–Ментен, концентрация субстрата [S]0 будет пропорциональна v0 только при условии, когда [S]0

Слайд 9

Описание слайда:

Зависимость скорости ферментативной реакции от концентрации субстрата

Слайд 10

Описание слайда:

Уравнение Лайнуивера-Бэрка

Слайд 11

Описание слайда:

Константа Михаэлиса Константа Михаэлиса хар-т сродство фермента к субстрату и не зависит от концентрации фермента. У какого фермента сродство к субстрату выше? =)

Слайд 12

Описание слайда:

Кинетическая основа ферментативного микроанализа при определении эффекторов.

Слайд 13

Описание слайда:

Конкурентное ингибирование

Слайд 14

Описание слайда:

Слайд 15

Описание слайда:

Слайд 16

Описание слайда:

Слайд 17

Описание слайда:

Кинетическая основа ферментативного микроанализа при определении эффекторов. Верхняя граница детектируемых концентраций обратимых ингибиторов определяется величиной ki. Взаимодействие с ферментом обратимых неконкурентных ингибиторов можно описать в виде следующей схемы: E + I →EI где I – ингибитор, ki = [EI]/([E][I]).

Слайд 18

Описание слайда:

Необратимое ингибирование Наблюдается в случае образования ковалентных стабильных связей между молекулой ингибитора и фермента. Чаще всего модификации подвергается активный центр. Пример: Ионы тяжелых металлов (ртути, серебра, мышьяка), которые в малых концентрациях блокируют сульфгидрильные группы активного центра. Аспирин (противовоспалительный нестероидный препарат) –ингибирует фермент циклооксигеназу, катализирующий реакцию образования простагландинов.

Слайд 19

Описание слайда:

Для необратимых ингибиторов: E + nI → Ei Уменьшение активности фермента Δ[E] будет пропорционально концентрации ингибитора: Δ[E] = n[I], где n – число молекул ингибитора, взаимодействующих с одной молекулой фермента.

Слайд 20

Описание слайда:

Использование в микроанализе сопряженных ферментативных систем: Использование сопряженных ферментативных систем увеличивает чувствительность микроанализа. В живой клетке многие ферментативные процессы тесно взаимосвязаны между собой, т. е. P одной реакции является S другой.

Слайд 21

Описание слайда:

Использование в микроанализе сопряженных ферментативных систем: Надо измерить содержание сахарозы в опытном образце. 1. сахароза → глюкоза + фруктоза (Е-сахараза) 2. глюкоза + О2+Н2О → глюконовая кислота + Н2О2 (Е- глюкозооксидаза) Для определения содержания пероксида можно использовать полярографический метод Или 3. Н2О2 + о-дианизидин → окрашенный продукт (Е-перосидаза) Чувствительность анализа повышается в 100–1000 раз